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細(xì)胞培養(yǎng)過程中碰到的小黑點(diǎn)，到底是什么呢？（附建議）
讓我們先來看看細(xì)胞遭受小黑點(diǎn)入侵后的災(zāi)難現(xiàn)場
小黑點(diǎn)之所以這么令人頭痛，是由于它的數(shù)量會隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加而不斷增加，當(dāng)數(shù)量多到一定程度的時(shí)候，就會對細(xì)胞的生長造成一定的影響，嚴(yán)重影響科研的進(jìn)展。在顯微鏡下觀察時(shí)往往表現(xiàn)為沒有光澤，體積較小的黑色顆粒。小編這邊結(jié)合自己多年細(xì)胞培養(yǎng)的經(jīng)歷和接觸到的客戶案例，跟大家分享下培養(yǎng)細(xì)胞過程中碰到過的小黑點(diǎn)。
1、細(xì)胞碎片
化學(xué)或者物理的強(qiáng)烈刺激（例如胰酶消化時(shí)間過長，吹打細(xì)胞太過用力等）往往會導(dǎo)致細(xì)胞死亡，產(chǎn)生很多的細(xì)胞碎片。在顯微鏡下進(jìn)行觀察時(shí)，可以看到很多呈不規(guī)則形態(tài)、沒有光澤的顆粒粘附在細(xì)胞培養(yǎng)皿的底部。
建議：狀態(tài)不好的細(xì)胞往往貼壁能力較強(qiáng)，因此切勿用移液器進(jìn)行強(qiáng)力的吹打，從而損害了健康的細(xì)胞；另外，控制好胰酶消化的時(shí)間，只需保證大部分正常的細(xì)胞被消化下來就可以了，然后更換新的細(xì)胞培養(yǎng)皿。
2、凋亡小體
體外培養(yǎng)的動物細(xì)胞很容易受到培養(yǎng)環(huán)境因素的影響，例如營養(yǎng)成分的改變、氧的供給、毒素、細(xì)胞代謝產(chǎn)物的積累、pH、 剪切力、細(xì)胞密度及微生物污染等。這些環(huán)境的改變都有可能誘發(fā)細(xì)胞的凋亡，從而產(chǎn)生很多分泌的凋亡小體。凋亡小體大多游離在培養(yǎng)基中，但也有一些會通過暴露的核酸彼此之間相互黏連，從而形成一個(gè)棕色的凋亡小體團(tuán)塊，沒有細(xì)胞光澤。
建議：細(xì)胞培養(yǎng)的過程中一定要控制細(xì)胞傳代的時(shí)間，不能讓細(xì)胞“長過”；不要使用過酸或者過堿的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；選用內(nèi)毒素含量較低的血清。
3、血清中的沉淀
磷酸鈣是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時(shí)候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動看上去可以活動，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。
建議：經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著增多，對于大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要進(jìn)過高溫滅活處理的。
4、黑膠蟲
對于細(xì)胞培養(yǎng)過程中的小黑點(diǎn)到底是什么，目前呼聲zui高的非黑膠蟲莫屬，但是小編查看了很多的資料，依舊不知道其為何方神圣。有人認(rèn)為是從血清中來的一種原蟲，有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白結(jié)晶，因此消滅黑膠蟲的方式也是各式各樣。
建議：如果污染的細(xì)胞數(shù)量不是很多，建議直接丟棄，或者重新復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
5、支原體污染
黑膠蟲的污染很難定性，大部分被黑膠蟲污染的細(xì)胞都存在生長遲緩，培養(yǎng)基顏色沒有明顯改變的現(xiàn)象，更像是受到了支原體的污染。已有通過使用支原體去除試劑解決黑膠蟲污染困擾的成功案例，為此Yeasen公司特別研發(fā)了針對支原體污染的一系列產(chǎn)品，包括支原體的檢測，支原體去除，以及去除后防止支原體再度感染的支原體預(yù)防試劑。（往下看 ）
產(chǎn)品訂購信息：
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編碼 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | |
檢測 | MycAwayTM –Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測試劑盒 | 40611ES 25/60 | 5/25/100 T | ¥ 467/1537 |
GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒 | 40601ES 10/20 | 10/20 assay | ¥ 327/557 | |
去除 | MycAwayTM Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAwayTM 支原體去除試劑（1000×） | 40607ES 01/03/08 | 0.1/1/5×5 ml | ¥ 168/467/1357 |
預(yù)防 | Mycoplasma Prevention Reagent MycAwayTM 支原體預(yù)防試劑（2000×） | 40608ES 03/08 | 1/5×1ml | ¥ 387/1257 |
MycAwayTM Spray (Ready-to-use) 支原體噴霧劑（即用型） | 40605ES 02/03/08 | 1/2/10×500 ml | ¥ 237/407/1617 | |
MycGuardTM-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤1號消毒衛(wèi)士（支原體污染預(yù)防） | 40609ES60 | 100 ml | ¥ 247 | |
MycGuardTM-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath 水浴鍋2號消毒衛(wèi)士（支原體污染預(yù)防） | 40610ES | 100 ml | ¥ 237 | |
