產(chǎn)品描述

考馬斯亮藍(lán)（Coomassie brilliant blue）是兩種相似三苯甲烷染料的總稱，有G250和R250兩種，結(jié)構(gòu)上前者比后者多了2個(gè)甲基，命名上 “G”為Green 的縮寫，因G250的藍(lán)色染料泛淺綠色；命名上“R”為Red的縮寫，因R250的藍(lán)色染料呈微紅色調(diào)；“250”表示考馬斯亮藍(lán)的純度。生化實(shí)驗(yàn)中常將考馬斯亮藍(lán)用于蛋白定量和蛋白電泳中蛋白染色。工作原理是：通過與蛋白質(zhì)內(nèi)的氨基和羧基基團(tuán)間的靜電結(jié)合作用以及范德華力，考馬斯亮藍(lán)與蛋白質(zhì)形成強(qiáng)但非共價(jià)鍵連接的復(fù)合物。蛋白-染料復(fù)合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負(fù)電荷陰離子（如磺酸基），從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見的藍(lán)色。

考馬斯亮藍(lán)R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于電泳蛋白的染色，染色靈敏度比氨基黑高5倍，可達(dá)0.1µg蛋白。R250染色后需要褪色，才能進(jìn)行蛋白條帶的觀察。

考馬斯亮藍(lán)G250的檢測(cè)靈敏度雖然較低，但也可替代R250，使用一種快速而簡(jiǎn)單的方法進(jìn)行蛋白染色。因其具有以下特性，即在低于pH 2.0時(shí)，溶液無色；pH 7.0時(shí)溶液呈深藍(lán)黑色；若發(fā)生酸化，溶液呈現(xiàn)透明的棕褐色。當(dāng)G250與蛋白結(jié)合，溶液又回到藍(lán)色，主要因?yàn)榈鞍追肿又車哂懈行缘?/span>pH環(huán)境。合適條件下，當(dāng)把膠放在酸化的G250溶液中染色，顯示出藍(lán)色的蛋白條帶，背景呈淺琥珀色。此種方法條帶快速顯色，且背景顏色也很淺使得條帶看起來很清楚，則不需要做褪色處理。大部分蛋白用G250檢測(cè)的下限是0.5µg。雖然靈敏度降低，取而代之的是操作快速以及方便，比R250染色節(jié)省高達(dá)11 h。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸與保存方法

室溫運(yùn)輸和保存即可。

使用方法

1. 標(biāo)準(zhǔn)染色步驟（考馬斯亮藍(lán)R250）

1. 蛋白電泳凝膠置于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液中固定，水平搖床上低速搖動(dòng)30min 24小時(shí)；
2. 去除固定液，更換0.25%考馬斯亮藍(lán)R250染色液（0.25% R250 溶于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液）*覆蓋住膠，染色2-4h。直至膠染成均勻的藍(lán)色。注意：當(dāng)膠在染色液內(nèi)肉眼不可見時(shí)，說明染色完成，否則與深色的染色液對(duì)比，凝膠區(qū)域看起來顏色偏淺。
3. 將膠重新放置在5%甲醇，7.5%醋酸，87.5%水溶液中脫色4-24h。約1-2h后蛋白條帶即可看到，直至背景變透明后脫色才結(jié)束。中間可更換2-4次脫色液；

注意：此方法可檢測(cè)到的蛋白量zui低達(dá)到0.1µg蛋白/條帶。

1. 將膠存放在7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。

1. 快速染色步驟（考馬斯亮藍(lán)R250）

1. 蛋白電泳凝膠在25%IPA，10%醋酸的水溶液中固定30-60min；
2. 將膠放置在10%醋酸的水溶液中進(jìn)行染色，含有60 µg/ml的考馬斯亮藍(lán)R250。約30min后條帶顯示，讓膠繼續(xù)染色直至達(dá)到理想的蛋白條帶。在此染色方法中膠的背景染色比較淺，由于使用膠的濃度很低。
3. 將膠重新放在10 %醋酸溶液中脫色2h或更長(zhǎng)。期間可更換2-4次脫色液；
4. 將膠存放在7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。

注意事項(xiàng)

1）0.25%考馬斯亮藍(lán)R250染色液配置的過程中，需要先用甲醇溶解R250粉末后，再加入醋酸和水，一般情況下不需要濾紙除雜。溶液可在4度存放6個(gè)月，若長(zhǎng)時(shí)間保存出現(xiàn)沉淀，可用濾紙過濾得到澄清液體。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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