產(chǎn)品描述

TMB，即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，中文全稱3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺，是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的常用顯色底物之一。在HRP的催化下，TMB被過(guò)氧化氫（H2O2）氧化生成藍(lán)色產(chǎn)物。主要吸收峰在370nm和652nm。在加入硫酸或者磷酸終止上述反應(yīng)后，產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，最大吸收峰為450 m。傳統(tǒng)的TMB顯色試劑通常以AB液形式提供（TMB和H2O2溶液分到兩管，僅在使用前才可混合使用），并且容易產(chǎn)生沉淀，使用起來(lái)相對(duì)不方便，且容易導(dǎo)致操作誤差。為克服以上缺點(diǎn)，我司采用新的TMB顯色技術(shù)，將所有相關(guān)試劑全部混合配成單一溶液。具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1）即開(kāi)即用，操作簡(jiǎn)單，使用前無(wú)需做AB液混合的準(zhǔn)備；檢測(cè)靈敏度不低于AB液體系；

2）僅由單一溶液組成，簡(jiǎn)化了操作步驟，也降低了操作誤差，結(jié)果更加穩(wěn)定；

3）含有 的穩(wěn)定劑，保證溶液4℃下長(zhǎng)期保存；

4）相比于其他HRP酶顯色底物（如ABTS和OPD）相比，檢測(cè)靈敏度更高，而且本TMB溶液不含有DMF或DMSO等有機(jī)溶劑，安全無(wú)毒；

5）另外，TMB溶液可分為沉淀可溶型和沉淀不可溶型，前者適用于ELISA及其他通過(guò)液體反應(yīng)檢測(cè)HRP的應(yīng)用，后者適用于WB或其他通過(guò)沉淀反應(yīng)檢測(cè)HRP的應(yīng)用。

本品為單一溶液形式且沉淀可溶型的TMB顯色液，適用于ELISA檢測(cè)，操作時(shí)只需加入200μl即用型的顯色液，做簡(jiǎn)單孵育，加入2M H2SO4終止反應(yīng)后，即可用分光光度計(jì)在450nm處測(cè)定吸光度。本品可供完成約500個(gè)樣品的檢測(cè)。另外，本品也可用于血液或血紅蛋白等樣品中過(guò)氧化物酶量的檢測(cè)。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。4℃避光保存，一年有效。

注意事項(xiàng)

1）TMB對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
2）正常情況，本顯色液呈現(xiàn)無(wú)色或者淡藍(lán)色（OD650nm＜0.04）。若是出現(xiàn)渾濁，或者顏色明顯很藍(lán)，應(yīng)停止使用。
3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
4）本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法
1） 使用之前，取出適量單組份TMB顯色液，使其回到室溫再開(kāi)始使用；
2） 對(duì)于ELISA檢測(cè)：參考ELISA 檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟，當(dāng)加入HRP標(biāo)記的抗體并孵育一段時(shí)間后，用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次3-5min。洗滌完畢后，去除洗滌液，加入200μl TMB顯色液。
對(duì)于在96孔板內(nèi)進(jìn)行的其他適當(dāng)檢測(cè)（如檢測(cè)組織或細(xì)胞樣品內(nèi)源性過(guò)氧化物水平）：直接在96孔板內(nèi)加入10-20μl 樣品，之后加入200μl TMB顯色液；
3） 室溫避光孵育3-30min或更長(zhǎng)時(shí)間（可長(zhǎng)達(dá)24h），直至顯色至預(yù)期深淺（此時(shí)反應(yīng)液為藍(lán)色）。
4） 加入50μl 2M H2SO4終止反應(yīng)，溶液由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，隨后在450nm測(cè)定吸光度。或直接在370nm或652nm測(cè)定吸光度。

常見(jiàn)問(wèn)題

1. 背景顯色太深

1）如果背景（沒(méi)有樣品的對(duì)照）顯色太深，一方面需考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉，如商業(yè)化的封閉液或者商業(yè)化的和一抗相同來(lái)源的血清（5-10%）進(jìn)行封閉。另一方面，直接使用經(jīng)過(guò)適當(dāng)親和吸附的二抗，以減小二抗的非特異性交叉吸附。

2）可以考慮縮短顯色時(shí)間，或降低二抗?jié)舛取Ａ硗?，選擇適當(dāng)強(qiáng)度的洗滌液，或延長(zhǎng)洗滌時(shí)間也會(huì)有所幫助。

3）可考慮TMB底物本身反應(yīng)過(guò)于強(qiáng)烈。為了避免沉淀的產(chǎn)生，可在終止反應(yīng)后馬上讀數(shù)，或者進(jìn)一步稀釋一抗和/或HRP結(jié)合物。

2. 沒(méi)有顯色或顯色太弱

1）適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測(cè)二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內(nèi)，檢測(cè)二抗是否被正常顯色。

2）可以考慮使用更加靈敏的放大檢測(cè)體系，例如使用 素檢測(cè)體系。

3）可以適當(dāng)延長(zhǎng)顯色時(shí)間。

4）如果上述改進(jìn)不能獲得預(yù)期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA試劑盒。