CM-DiI 活細胞染色劑

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

CM-Dil為DiI的一種衍生物，通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標記細胞，適合監(jiān)測細胞運動以及細胞定位分析。因具有良好的染料維持性，可用以追蹤多次傳代細胞的運動特性。其有著強而穩(wěn)定的紅色熒光（Ex/Em=553/570nm），與綠色熒光染料以及蛋白具有良好的熒光分辨性，適合做多重指標染色。CM-Dil可自由穿透質(zhì)膜進入細胞，從而產(chǎn)生不具有膜滲透性的反應(yīng)產(chǎn)物。經(jīng)過幾次傳代此染料還可完好的維持在活細胞內(nèi)，染料隨著細胞分裂傳入子代細胞內(nèi)，但不會進入相鄰細胞。至少在72小時內(nèi)保持熒光信號（一般可傳3~6代）。工作濃度下，此染料無細胞毒性，不會影響細胞活力以及增殖能力。

與Dil相比，CM-Dil水溶性更好一些，便于懸浮細胞和固定細胞染色溶液的制備；CM-Dil攜帶的CM基團（即氯甲基替代基團）能與多肽及蛋白上的巰基反應(yīng)從而使該分子在醛類物質(zhì)中保持穩(wěn)定。與其他膜染料如DiI和PKH26不同，一些細胞經(jīng)CM-Dil染色后，可在后續(xù)的固定，透化和石蠟包埋處理中維持穩(wěn)定的標記，因此特別適用于同時做細胞膜標記以及后續(xù)的免疫組化，熒光原位雜交或者電鏡觀察的實驗。

研究證實，CM-DiI標記后熒光在胞內(nèi)表達穩(wěn)定，陽性標記率達98%以上，標記細胞形態(tài)良好，能有效地觀察細胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)擞浀募毎⑷塍w內(nèi)，可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸與保存方法

室溫運輸。

產(chǎn)品-20 ºC干燥避光保存，有效期一年。

注意事項

1)       熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2)       為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 染色液制備

1）配置DMF，DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用DMF、DMSO或EtOH配制濃度1-2mg/ml。

注：未使用的儲存液保存在-20℃，分裝保存，避免反復(fù)凍融。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或D-PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～2 μM的工作液。

注：*的工作液濃度請根據(jù)不同細胞和自身的實驗體系來調(diào)整。

2. 細胞標記（懸浮細胞）

1）   在標記前根據(jù)實驗要求按照上述方法配制好工作液；

2）   建議待標記細胞在染色工作液中于37℃孵育≤5min，再于4℃孵育15min（低溫孵育可降低細胞對染料的內(nèi)吞作用，有助于染料對質(zhì)膜的標記，并且降低染料定位細胞質(zhì)囊泡的可能性）。

3）   標記完成后，用PBS清洗細胞，并用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。

注：對于貼壁細胞，可直接就貼壁狀態(tài)的細胞進行熒光標記，相較于消化處理后的細胞具有更高的活力。

2. 染色后處理

1）CM-DiI染色后的細胞直接用3.7% 甲醛（溶于PBS），于37℃固定10min；

2）室溫條件PBS清洗2次，每次5min；

3）于-20℃中，用丙酮透化處理10min；

4）室溫條件PBS清洗2次，每次5min；并根據(jù)自身的實驗要求以及細胞類型，進行后續(xù)的實驗如石蠟包埋-免疫組化分析，電鏡分析等。有報道提到，經(jīng)CM-DiI染色后的大鼠嗜鉻細胞瘤細胞可兼容2%(w/v)多聚甲醛和0.2%(w/v) Triton X-100的透化作用；從綿陽淋巴細胞內(nèi)再次純化的CM-DiI標記細胞，經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇，以及脫水后仍能維持熒光；