產(chǎn)品信息

背景描述

腔腸素（Coelenterazine）是自然界中資源的天然熒光素，是絕大多數(shù)海洋發(fā)光生物（超過75%）的光能貯存分子。腔腸素可作為許多熒光素酶的底物，比如海腎熒光素酶（Rluc），Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc），以及包括水母發(fā)光蛋白（aequorin）和藪枝螅發(fā)光蛋白（Obelia）在內(nèi)的光蛋白（Photoproteins）。其發(fā)光原理是：以腔腸素為底物的熒光素酶在有分子氧的條件下，氧化腔腸素，產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物，并在此過程中發(fā)射藍(lán)色光，峰值發(fā)射波長約為450~480 nm。

腔腸素作為水母發(fā)光蛋白復(fù)合物（Aequorin）的組成成分，只有與鈣離子（Ca2+）結(jié)合后，才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide，同時釋放出CO2和藍(lán)色熒光（~466 nm）。其具有以下幾個優(yōu)點(diǎn)：1）能檢測較大范圍的Ca2+濃度（0.1-100 μM）；2）樣品無自體熒光，背景熒光較低，盡管信號較熒光鈣離子指示劑弱，但信噪比更高，因此具有較高靈敏度；3）Aequorin能夠穩(wěn)定維持在細(xì)胞內(nèi)，能夠進(jìn)行數(shù)小時至數(shù)天Ca2+的監(jiān)測。

腔腸素具有能量轉(zhuǎn)移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）的特性：在底物腔腸素存在的情況下，熒光素酶（如Rluc）催化底物發(fā)生藍(lán)光，能量轉(zhuǎn)移到EYFP（增強(qiáng)的黃色熒光蛋白），發(fā)出綠光（~530 nm）。通過Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白兩者間的相互關(guān)系研究蛋白-蛋白之間的相互作用。BRET的信號可通過比較綠光和藍(lán)光的量來進(jìn)行測定，消減了因細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞類型和其他實(shí)驗(yàn)變量而引起的數(shù)據(jù)變量。

主要應(yīng)用

1. 活體成像。

2. 報告基因檢測。

3. 檢測細(xì)胞/組織內(nèi)活性氧（ROS）水平：細(xì)胞和組織內(nèi)的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子能夠增強(qiáng)腔腸素在酶非依賴性的氧化體系中自發(fā)熒光。

4. 高通量篩選。

5. 監(jiān)測活細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平。

產(chǎn)品描述

腔腸素h（Coelenterazineh）是海腎熒光素酶（Rluc）和Gaussia熒光素酶（Gluc）等多種熒光素酶的作用底物，其發(fā)光強(qiáng)度比天然腔腸素高10倍以上，適用于報告基因分析。也是水母發(fā)光蛋白的輔助因子，可用于檢測活細(xì)胞中鈣離子濃度。

本品是即用型腔腸素h，特別設(shè)計用于Renilla luciferase體內(nèi)活體成像研究。最小化產(chǎn)品成分的變化、凍融次數(shù)和嚴(yán)格控制批間差異確保結(jié)果的高重復(fù)性。本品優(yōu)勢：①溶于丙二醇和檸檬酸，穩(wěn)定性高，即開即用，無需考慮粉末配制液體過程造成的穩(wěn)定性差異；②批次間嚴(yán)格控制差異，特別設(shè)計用于體內(nèi)研究；③即用型產(chǎn)品，減少時間和精力；4）IVIS成像系統(tǒng)驗(yàn)證，保證成像質(zhì)量。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃避光保存。長期保存條件：-80℃避光保存。有效期一年。

產(chǎn)品組分

使用方法

1.準(zhǔn)備工作

實(shí)驗(yàn)前，取出-20℃或更低溫度保存的即用型腔腸素h，37℃水浴鍋解凍，稍微漩渦混勻后即可使用。

【注】：避免反復(fù)凍融，務(wù)必根據(jù)實(shí)際用量取出所需劑量產(chǎn)品。

2.注射方法及劑量

①靜脈注射：推薦劑量15 μg/mouse (100 μl/mouse）。使用1 ml注射器直接從瓶內(nèi)吸取溶液后，用25 gauge或更高的針頭注射入小鼠體內(nèi)。盡快成像檢測以獲得峰值信號。

【注】：靜脈給藥后小鼠可能經(jīng)歷短時間痙攣，但能夠快速恢復(fù)。

②腹腔注射：推薦劑量是30 μg/mouse (200 μl/mouse)。方法同上。

應(yīng)用實(shí)例

Figure 1 Coelenterazine h has been optimized for in vivo use with IVIS imaging systems. (A)5pmol BRET Qdot 700 was injected intravenously in a nu/nu mouse. 10 minutes post BRET Qdot injection 15μg/mouse Coelenterazine h was injected intravenously. Chart shows peak signal was observed right after injection at ~22 seconds followed by rapid clearance. Images were taken with IVIS kinectic. (B)1, 2 and 4pmol BRET Qdot 655 were injected subcutaneously in a nu/nu mouse. 10 minutes post BRET Qdot injection 10μg/mouse Coelenterazine h was injected intraperitoneally. Chart shows that peak signal was reached around 27 minutes post i.p. injection of Coelenterazine h.

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！

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HB211119