產(chǎn)品名稱: LysoTracker Green DND-26 溶酶體綠色熒光探針

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

LysoTracker®系列探針是對活細(xì)胞中的酸性區(qū)室進行選擇性染色的一類熒光染料，該類探針具有幾大重要的特點，1）選擇性標(biāo)記酸性細(xì)胞器；2）納摩爾級（nM）濃度即可有效標(biāo)記活細(xì)胞；3）具有多色探針提供，可根據(jù)情況對樣品進行多標(biāo)實驗。LysoTracker®結(jié)構(gòu)上由一個熒光基團和相連的弱堿基構(gòu)成，可自由穿過細(xì)胞膜，一般聚集在球形細(xì)胞器上，適用于觀察溶酶體內(nèi)部生物合成及相關(guān)發(fā)病機理。Lysotracker中性pH下僅僅發(fā)生部分質(zhì)子化，因此該探針標(biāo)記細(xì)胞器的原理可能與其*質(zhì)子化并滯留在細(xì)胞器膜上有關(guān)。

本品LysoTracker® Green DND-26為綠色熒光標(biāo)記的溶酶體探針，具有504/511nm的zui大激發(fā)/發(fā)射波長。本品以溶于無水DMSO的1mM儲存液形式提供。

產(chǎn)品性質(zhì)

CAS號（CAS NO.）	N/A
分子式（Formula）	C18H26BClF2N4O
分子量（Molecular Weight）	398.6894
Ex/Em（nm）	504/511
外觀（Appearance）	黃色溶液
結(jié)構(gòu)式（Structure）

運輸和保存方法

室溫運輸。-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。*工作濃度需根據(jù)不同的實驗要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的膜通透性等進行優(yōu)化。

1.工作液的配制

利用培養(yǎng)基或合適的緩沖液將1mM 儲存液稀釋至工作濃度，推薦工作液濃度為50-75nM；

【注意】：1）為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。2）若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，會觀察到熒光信號的衰減和細(xì)胞的空泡化現(xiàn)象。

2.染色

2.1 對于貼壁細(xì)胞

1）將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長。

2）待細(xì)胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量37℃預(yù)熱的含探針工作液。于生長狀態(tài)下孵育30min～2h（具體孵育時間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）?！咀⒁狻浚簩ysotracker Green DND-26內(nèi)化過程的動力學(xué)研究表明，活細(xì)胞攝取此染料僅需數(shù)秒即可。缺點在于此探針可能引起溶酶體產(chǎn)生“堿性效應(yīng)Alkalizing effect”，也就是說過長孵育時間會誘導(dǎo)溶酶體pH值提高。建議僅當(dāng)該探針于37℃孵育細(xì)胞1-5min才可用作pH指示劑。

3）利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

2.2 對于懸浮細(xì)胞

1）離心，吸除上清。

2）利用37℃預(yù)熱的探針工作液重懸細(xì)胞，于生長狀態(tài)下孵育30min～2h（具體時間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。

3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

4）置于熒光鏡下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或加長染色時間。

【注意】：對于懸浮細(xì)胞，也可將細(xì)胞貼附于經(jīng)BD Cell-Tak處理過的蓋玻片上，然后使用類似于貼壁細(xì)胞的方法進行染色。

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