產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

CFDA, SE，英文全稱Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，是一種可對活細胞進行熒光標(biāo)記的細胞示蹤染料，不僅可用于細胞增殖的體外實驗，還可用于追蹤細胞在體內(nèi)的分裂增殖過程。 

CFDA, SE是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate，F(xiàn)DA）的衍生物，具細胞膜滲透性，本身不具有熒光發(fā)光性。當(dāng)通過被動運輸穿透細胞膜進入活細胞后，可被胞漿內(nèi)的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester，CFSE），可發(fā)強烈的綠色熒光，不能穿透細胞膜，能完好的保留在胞內(nèi)。CFSE還可自發(fā)性并不可逆地與細胞內(nèi)的氨基結(jié)合從而偶聯(lián)到細胞蛋白質(zhì)上，同時過量且未被偶聯(lián)的CFDA, SE通過被動擴散回到細胞外培養(yǎng)基內(nèi)，被后續(xù)清洗步驟所清除。經(jīng)CFDA, SE標(biāo)記的非分裂細胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時間可達數(shù)月，因此非常適用于細胞群落分析。

CFDA, SE標(biāo)記細胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，CFSE 標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變?yōu)橛H代細胞的一半，通過流式細胞儀（FL1通道）根據(jù)熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次（1/2的熒光強度），二次（1/4的熒光強度），三次（1/8的熒光強度），以及更多分裂次數(shù)的細胞。CFSA，SE可檢測分裂次數(shù)多達八次甚至更多。經(jīng)CFDA, SE標(biāo)記的細胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。CFDA, SE常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可用于成纖維細胞，自然殺傷細胞，造血祖細胞等其他細胞的增殖檢測。

CFDA, SE標(biāo)記細胞呈綠色熒光，Ex=494nm，Em=521nm，除了流式細胞儀檢測細胞增殖外，還可用熒光酶標(biāo)板定量活細胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。本品以粉末形式提供，需用DMSO制備儲存液后再使用。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸與保存

室溫運輸。-20℃干燥避光保存，有效期一年。避免反復(fù)凍融。

注意事項

1）不同的細胞其細胞內(nèi)酯酶活性不同，因此染色效果具有差異性。

2）熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。

3）為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。

操作方法

1. CFSE儲存液（5mM）的配制

用1ml DMSO溶解2.79mg CFSE，充分混勻即得到5mM的儲存液（1mg/mL的CFSE溶液濃度相當(dāng)于其摩爾濃度1.8mM）。

注意：該儲存液需立即使用，根據(jù)使用量計算如有剩余請務(wù)必分裝后于≤-20℃避光干燥保存，避免反復(fù)凍融。

2. CFSE工作液（0.5-5µM）的配制

使用前用含20mM Hepes的Hanks 緩沖液（HHBS）或其他不含氨基的合適緩沖液（pH=7.0）對上述CFSE 儲存液進行1,000~10,000倍稀釋，并旋渦震蕩混勻。

3. 操作方法

注意：以下是針對活細胞染色的推薦步驟，可根據(jù)實際情況進行適當(dāng)調(diào)整。

1）根據(jù)實驗要求，用適當(dāng)藥物處理細胞；

2）離心收集細胞，調(diào)整細胞濃度為1-5×105個/管；

3）用500µL CFSE工作液懸浮細胞，于室溫或37℃避光孵育10-30min；

4）吸除CFSE 染液，用HHBS或其他合適緩沖液清洗細胞，用500µL預(yù)熱HHBS或培養(yǎng)液懸浮細胞；

5）在Ex/Em=490/520nm下用流式細胞儀（FL1通道）或熒光顯微鏡觀察細胞。

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HB210721