產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

DiO是一種親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。進入細胞膜后，DiO在整個細胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。DiO在進入細胞膜之前熒光非常弱，當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強，被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命?？梢杂脴藴实腇ITC濾光片檢測。

DiO通常不會明顯影響細胞的生存力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑（long-term tracer）。除了簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。

產(chǎn)品性質

運輸與保存方法

冰袋運輸。產(chǎn)品-20 oC干燥避光保存，有效期1年。

注意事項

1、熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
2、染色固定的細胞或組織時，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛固定，使用其它不適當固定液會導致熒光背景較高。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

4、本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法

1. 染色液制備

1.1、配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用DMSO或EtOH配置濃度1～2 mM。

【注】：a、未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融，可穩(wěn)定保存6個月。

b、發(fā)現(xiàn)較難溶解時可以適當加熱，并用超聲處理以促進溶解。

c、必須保證所用溶劑新鮮無水。

1.2、工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。

【注】：工作液最終濃度建議根據(jù)不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。

2. 懸浮細胞染色

2.1、加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×10⁶/mL。
2.2、37℃孵育細胞2～20 min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以2 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。

2.3、孵育結束，按1000～1500 rpm離心5 min。

2.4、傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。

2.5、重復2.3，2.4步驟兩次以上。

3. 貼壁細胞的染色

3.1、將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

3.2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

3.3、在蓋玻片的一角加入100 μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。
3.4、37℃孵育細胞 2～20 min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?0 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。

3.5、吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10 min，然后吸干培養(yǎng)基。

4. 顯微鏡檢測

4.1、DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。

4.2、多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

表1 相關產(chǎn)品性質

HB220415