DiD Perchlorate (DiIC₁₈(5)) 細(xì)胞膜紅色熒光探針

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

DiI、DiO、DiD和DiR是一系列親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)，這是一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱）結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。這類染料具有很高的摩爾消光系數(shù)，極性依賴性的熒光和很短的激發(fā)壽命。

DiD是DiI的衍生物，具有明顯往紅光遷移的激發(fā)和發(fā)射光譜，這一特性使其特別適合標(biāo)記具顯著自熒光效應(yīng)的細(xì)胞或組織。DiD可被633nm的氦-氖（He-Ne）激光所激發(fā)，呈紅色熒光，在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，進(jìn)入細(xì)胞后，染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，*濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞染色。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸和保存方法

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。產(chǎn)品-20 oC干燥避光保存，有效期二年。

注意事項(xiàng)

1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）   熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

使用方法

1. 染色液制備

（1）配置DMSO或EtOH 儲(chǔ)存液：儲(chǔ)存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。

【注】未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融。

（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。

【注】工作液zui終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始*濃度的摸索。

2. 懸浮細(xì)胞染色

（1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×10⁶/mL。

（2）37 ℃孵育細(xì)胞 2～20min，不同的細(xì)胞*培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?/span>20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

（3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。

（4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

（5）重復(fù)（3），（4）步驟兩次以上。

3. 貼壁細(xì)胞的染色

（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

（4）37 ℃孵育細(xì)胞 2～20min，不同的細(xì)胞*培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?/span>20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10min，然后吸干培養(yǎng)基。

4. 顯微鏡檢測(cè)

（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。

（2）多色染料的同時(shí)檢測(cè)，濾光器按照以下設(shè)定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細(xì)胞可分別用流式細(xì)胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測(cè)。

表1 相關(guān)產(chǎn)品性質(zhì)