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40802ES03脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 Transfection Reagent
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 40802ES03 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠(chǎng)商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪(fǎng)問(wèn)次數(shù)：2134更新時(shí)間：2024-09-04 16:59:00
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1mL |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 40802ES03 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent
脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格（元） | *（元） |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 40802ES02 | 0.5ml | 4℃ | 738.00 | 488.00 |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 40802ES03 | 1 ml | 4℃ | 1308.00 | 868.00 |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 40802ES08 | 5×1ml | 4℃ | 4878.00 | 3248.00 |
產(chǎn)品描述
Hieff TransTM脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑是一種多用途的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，適用于DNA、RNA和寡核苷酸的轉(zhuǎn)染，對(duì)大多數(shù)真核細(xì)胞具有很高的轉(zhuǎn)染效率。其*的配方使其可直接加入培養(yǎng)基中，血清的存在不會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率，這樣可以減少去除血清對(duì)細(xì)胞的損傷。轉(zhuǎn)染后不需要除去核酸-Hieff TransTM復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基，也可在4～6小時(shí)后除去。
Hieff TransTM以無(wú)菌的液體形式提供。通常情況下對(duì)于 24 孔板轉(zhuǎn)染，每次用1.5μl左右，則1ml Hieff TransTM約可做660 次轉(zhuǎn)染；對(duì)于6孔板，每次用6μl左右，則1ml Hieff TransTM約可做160 次轉(zhuǎn)染；
運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。產(chǎn)品4oC保存，一年有效。不可冷凍！
注意事項(xiàng)
1）Hieff TransTM脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑要求細(xì)胞鋪板密度較高，以90%-95%為佳，這有助于減少陽(yáng)離子脂質(zhì)體細(xì)胞毒性造成的影響；如果你研究的基因要求比較長(zhǎng)的表達(dá)時(shí)間，比如細(xì)胞周期相關(guān)基因，或者細(xì)胞表面蛋白，選擇細(xì)胞鋪板密度要求較低的轉(zhuǎn)染試劑，不適合用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑。
2）Hieff TransTM脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染，并且轉(zhuǎn)染前后不需要換培養(yǎng)基。但是，制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。另外，要檢測(cè)所用的無(wú)血清培養(yǎng)基與脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3）轉(zhuǎn)染的時(shí)候培養(yǎng)基中不能添加抗生素。
4）使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率，質(zhì)粒中的內(nèi)毒素是轉(zhuǎn)染的大敵。
5）陽(yáng)離子脂質(zhì)體應(yīng)該在4度保存，要注意避免多次反復(fù)長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)蓋，因?yàn)榭赡軙?huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。
6）初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑量以得到zui大的轉(zhuǎn)染效率。DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的比例，通常推薦是1:2-1:3，比如24孔板內(nèi)接種0.5-2×105個(gè)細(xì)胞，使用0.5 µg DNA和1-1.5 µl 轉(zhuǎn)染試劑。通過(guò)調(diào)整DNA/Hieff TransTM脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑比例優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率，保證細(xì)胞密度大于90%，DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值在1：0.5-1：5。
操作流程（以24孔板為例，其他培養(yǎng)板加樣體積請(qǐng)參考表一）
【注】：轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類(lèi)型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響，建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化*使用量。
貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天（20-24小時(shí)），胰|酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)，細(xì)胞鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate）。
懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制DNA復(fù)合物之前，24孔板中細(xì)胞鋪板，每500µl生長(zhǎng)培養(yǎng)基（不含抗生素）中加入4-8 × 105 cells。
1. 按照以下體系配制DNA-Hieff TransTM脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物：
1）對(duì)于每孔細(xì)胞，使用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋0.5μg DNA?；靹颉?/span>
2）對(duì)于每孔細(xì)胞，使用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋0.6-2.5 μl Hieff TransTM脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑。
Hieff TransTM脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑稀釋后室溫孵育5min（在30min內(nèi)同稀釋的DNA 混合，保溫時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)降低活性）。
【注意】：即使脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑使用OPTI-MEMⅠ稀釋?zhuān)?xì)胞也可以使用DMEM 培養(yǎng)。如果DMEM 作為脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑的稀釋液，必須在5min內(nèi)同稀釋的DNA混合。
2. 混合稀釋的DNA和稀釋的脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑（總體積100µl），輕輕混勻，并在室溫（15-25℃）孵育20min，使得DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物形成。此時(shí)溶液可能會(huì)混濁，但不會(huì)影響轉(zhuǎn)染。
【注意】：DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物室溫至少穩(wěn)定保存5h。
3. 直接將100µl DNA-Hieff TransTM復(fù)合物加入到細(xì)胞培養(yǎng)板每個(gè)孔中，搖動(dòng)培養(yǎng)板，輕輕混勻。
【注意】：如果在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染，使用含血清的正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞鋪板。在加入復(fù)合物前移去生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換為500µl無(wú)血清培養(yǎng)基。
4. 37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-48h，直至進(jìn)行轉(zhuǎn)基因表達(dá)分析，無(wú)需去掉復(fù)合物或更換培養(yǎng)基。然而，可能有必要在4-6h后更換生長(zhǎng)培養(yǎng)基，不會(huì)降低轉(zhuǎn)染活性。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株：轉(zhuǎn)染24h后，按照1：10或更高比例在細(xì)胞中加入新鮮生長(zhǎng)培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染48h后加入篩選培養(yǎng)基。
懸浮細(xì)胞株：在細(xì)胞中加入DNA-Hieff TransTM復(fù)合物后，如果需要可以4h后加入PMA和/或PHA。對(duì)于Jurkat細(xì)胞，PHA和PMA的終濃度分別為1µg/ml和50ng/ml，可以提高CMV啟動(dòng)子活性和基因表達(dá)。對(duì)于K562細(xì)胞，只加入PMA足以提高啟動(dòng)子活性。
轉(zhuǎn)染體系的調(diào)整
對(duì)于不同的細(xì)胞培養(yǎng)板，Hieff TransTM脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑、DNA、細(xì)胞和培養(yǎng)基的使用量會(huì)有所不同，具體請(qǐng)參考下表（表一）。對(duì)于96 孔板培養(yǎng)，不需要提前一天進(jìn)行細(xì)胞鋪板，可以直接在平板中制備復(fù)合物，然后將細(xì)胞懸浮液加入到復(fù)合物就可以了，這樣進(jìn)一步減少了轉(zhuǎn)染時(shí)間。這種改進(jìn)步驟已經(jīng)過(guò)293-H，293-F，COS-7L和CHO細(xì)胞的試驗(yàn)，同傳統(tǒng)方法相比活性稍低?？旖莸牟襟E和蛋白表達(dá)細(xì)胞系的高效轉(zhuǎn)染使得脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑非常適用于96 孔板的高通量轉(zhuǎn)染，比如cDNA文庫(kù)的篩選和蛋白瞬時(shí)表達(dá)。
表一 在不同的培養(yǎng)容器中轉(zhuǎn)染，脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑，核酸，細(xì)胞和培養(yǎng)基的用量
Culture vessel | Surf. area per well1 | Shared reagents | DNA transfection | RNAi transfection | |||
Vol. of plating medium | Vol. of dilution medium2 | DNA | 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | RNA | 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | ||
96-well | 0.3 cm2 | 100 μl | 2×25 μl | 0.1 μg | 0.2-0.5 μl | 5 pmol | 0.25 μl |
24-well | 2 cm2 | 500 μl | 2×50 μl | 0.5 μg | 0.6-2.5 μl | 20 pmol | 1.0 μl |
12-well | 4 cm2 | 1 ml | 2×100 μl | 1 μg | 2-4.5 μl | 40 pmol | 2.0 μl |
6-well | 10 cm2 | 2 ml | 2×250 μl | 2-4 μg | 5-10 μl | 100 pmol | 5 μl |
60-mm | 20 cm2 | 5 ml | 2×0.5 ml | 4-8 μg | 10-20 μl | 200 pmol | 10 μl |
10-cm | 60 cm2 | 15 ml | 2×1.5 ml | 12-24μg | 30-60 μl | 600 pmol | 30 μl |
1 不同廠(chǎng)商提供的細(xì)胞培養(yǎng)板表面積可能有所不同；
2 稀釋DNA或RNAi所用的培養(yǎng)基體積。
【注】：該表使用量?jī)H供參考，具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。使用時(shí)DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值保持在1:0.5-1:5。
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產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
40803ES70 | Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑 | 200T | 298.00 |
40804ES76 | Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺（10 mg/ml） | 500μl | 180.00 |
40804ES86 | Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺（10 mg/ml） | 5×500μl | 500.00 |
