Protein Silver Stain Kit 蛋白質(zhì)銀染試劑盒

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

生化實驗中蛋白質(zhì)通過凝膠電泳的方式分離后需經(jīng)過染色才能肉眼可見，染色方法有兩種：1）染料染色法；2）金屬染色法。前者主要是考馬斯亮藍染色法，后者主要采用銀染法。前者操比較簡單，省時；但是后者具有較高的檢測靈敏性，可檢測到10-100 ng蛋白質(zhì)，比考馬斯亮藍染色法靈敏100多倍。

本試劑盒采用了銀染的方法，用于對聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝膠中的微量蛋白質(zhì)進行檢測。

產(chǎn)品組分

運輸和保存方法

冰袋運輸。

4℃保存，1年有效。銀溶液、溶液I和溶液II需要避光保存。

使用方法

以10cm²凝膠為例，不同凝膠大小可按比例調(diào)整增敏液、顯色液和終止液的體積。

所有濃縮液使用前用去離子水稀釋至1×工作液，水平搖床的轉(zhuǎn)速設(shè)置在55rpm左右。

1）固定：按體積比，冰醋酸：無水乙醇：去離子水=1：4：5配制100ml固定液，將電泳后的凝膠放入固定液中，室溫條件置于水平搖床上，緩慢震蕩固定120min；

2）增敏：用去離子水分別稀釋5×敏化底物液，以及5×溶液I至1×工作液。取65.5ml 1×敏化底物液加入4ml 1×溶液I、500μl 溶液II、30ml 無水乙醇混勻即得到增敏液。然后將凝膠放入100ml增敏液中，室溫條件置于搖床上搖動60min；

3）洗滌：用去離子水漂洗30min，期間更換3~5次。

4）銀染：用去離子水稀釋10×銀溶液至1×工作液。取10ml 1×銀溶液加入40μl 溶液III，加入去離子水補足體積至100ml即得到銀染液。然后將凝膠放入100ml銀染液中，室溫條件置于搖床上搖動60min；

5）洗滌：用去離子水漂洗銀染后的凝膠4次，每次1min；

6）顯色：用去離子水稀釋10×顯影底物液至1×工作液。取40ml 1×顯影底物液加入40μl 溶液III、3μl 1×溶液I，加入去離子水補足體積至100ml即得到顯色液。然后將凝膠放入100ml顯色液中，室溫條件置于搖床上搖動6min?！?strong>注意】：顯色  的時間可控制在1-15min，直至出現(xiàn)比較理想的預(yù)期蛋白條帶。

7）終止：用去離子水稀釋10×終止液至1×終止液。取100ml 1×終止液，將顯色后的凝膠放入其中，室溫條件置于搖床上搖動，反應(yīng)40min；

8）洗滌：用100ml去離子水洗30min，期間更換2次。

9）照相：保存顯色出的蛋白質(zhì)條帶并記錄。

注意事項

1）顯色過程較快，要注意把握時間，避免染色過度。

2）所用器皿要很潔凈，不要用手直接接觸，以免雜蛋白污染。

3）清洗用水盡量用高純度去離子水如ddH₂O，可以減少背景著色。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。