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20510ES08GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML
參考價(jià): 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 20510ES08 產(chǎn)品型號(hào)
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問(wèn)次數(shù):365更新時(shí)間:2022-02-10 11:56:15

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一種GST標(biāo)簽蛋白純化樹(shù)脂,可以一步純化各種表達(dá)系統(tǒng)中谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽重組衍生物。在結(jié)構(gòu)上,該樹(shù)脂是以高度交聯(lián)的4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì),通過(guò)12個(gè)原子的間隔臂,用化學(xué)方法共價(jià)結(jié)合還原型谷胱甘肽制作而成,具有更高的物理化學(xué)特性,可以耐受更高的壓力,在相對(duì)較高的流速下,實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化
產(chǎn)品介紹

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML

GST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱,5ML

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱          

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

儲(chǔ)存

價(jià)格(元)

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML

GST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱,5ML

20510ES08

5ml

4

938.00

20510ES25

5×5ml

4

3928.00

產(chǎn)品描述

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一種GST標(biāo)簽蛋白純化樹(shù)脂,可以一步純化各種表達(dá)系統(tǒng)中谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽重組衍生物。在結(jié)構(gòu)上,該樹(shù)脂是以高度交聯(lián)的4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì),通過(guò)12個(gè)原子的間隔臂,用化學(xué)方法共價(jià)結(jié)合還原型谷胱甘肽制作而成,具有更高的物理化學(xué)特性,可以耐受更高的壓力,在相對(duì)較高的流速下,實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化,更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。

是裝填了GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF的一種中壓預(yù)裝柱,規(guī)格5ml,預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口,可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng),如?KTA 等,方便客戶操作。

產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)(Matrix

高度交聯(lián)的4%瓊脂糖微球

配體(Ligand

通過(guò)12原子間隔臂偶聯(lián)的谷胱甘肽

孔徑(Bead size

45-165μm

載量(Capacity

10mg GST protein/ml 基質(zhì)(40kDa

zui大壓力(PressureMax

0.3 MPa, 3bar

pH穩(wěn)定范圍(pH range

3-12

儲(chǔ)存緩沖液(Buffer

20%乙醇

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。4保存,有效期2年。

需準(zhǔn)備試劑

所用水和Buffer在使用前用0.22μm0.45μm濾膜過(guò)濾除菌。

結(jié)合/洗雜緩沖液PBS,pH7.4(140mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH7.4)

洗脫緩沖液50mM Tris-HCl, 10mM 還原型谷胱甘肽,pH 8.0

【注】:結(jié)合/洗雜緩沖液或者洗脫緩沖液中可加入1-10mM DTT。









使用方法

【注】樣品在上樣前用0.22μm0.45μm濾膜過(guò)濾,減少雜質(zhì)以防阻塞柱子。

1樣品純化(以Akta為例)

1準(zhǔn)備:將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子,將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口,將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中,并旋緊。

2清洗3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲(chǔ)存液。

3平衡:5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡層析柱,使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護(hù)蛋白的作用。

4上樣:將樣品加到平衡好的層析柱中,推薦流速1-5ml/min,保證目的蛋白與樹(shù)脂充分接觸,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待檢測(cè)。

【注】:樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少,也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過(guò)柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓,使得進(jìn)樣器更難使用。

5洗雜:10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗,直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線,去除非特異性吸附的雜蛋白,收集洗雜液,待檢測(cè)。

6洗脫:用洗脫Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中,通常5倍柱體積洗脫液足夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛?lái)。也可以用一個(gè)小的梯度,例如20倍柱體積或更多,來(lái)分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì)。

7清洗及保存:依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer5倍柱體積的去離子水平衡填料,zui后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡,然后保存在等體積的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被細(xì)菌污染。

2 SDS-PAGE檢測(cè)

將純化過(guò)程中得到的樣品(包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等)利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè),判定其純化效果。

3 填料清洗

GST標(biāo)簽蛋白純化產(chǎn)品可以重復(fù)使用而無(wú)需再生,但隨著非特異結(jié)合蛋白的增多和蛋白的聚集,會(huì)造成流速和結(jié)合載量性能下降,此時(shí)需對(duì)填料進(jìn)行清洗。

1)去除一些沉淀或變形物質(zhì)

2倍柱體積的6M 鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗,然后立即用5倍柱體積的PBS,pH7.4清洗。

2)去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)

3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積1% Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱體積的PBSpH7.4清洗。

注意事項(xiàng)

1)請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2)所有操作過(guò)程中,樣本需要在4或冰上操作。

3)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


附表 問(wèn)題及解決方案

問(wèn)題

可能原因

推薦解決方案

柱子反壓過(guò)高

填料被堵塞

清洗樹(shù)脂。

裂解液中含有微小的固體顆粒,建議上樣前用0.22μm0.45μm濾膜過(guò)濾,或離心去除。

樣品太黏稠

樣品中含高濃度的核酸,延長(zhǎng)破碎時(shí)間直至粘度降低,或添加DNaseI (終濃度為5μg/ml),Mg2+(終濃度1mM),冰上孵育10-15min

緩沖液太黏稠

有機(jī)試劑或蛋白穩(wěn)定試劑(如甘油等)可能會(huì)引起反壓增高,降低操作流速。

洗脫組分中無(wú)目的蛋白

GST標(biāo)簽蛋白變性了

使用溫和的裂解條件,實(shí)驗(yàn)條件以經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。

過(guò)度的裂解使目的蛋白變性

目的蛋白聚集產(chǎn)生沉淀

在細(xì)胞裂解前溶液中加入DTT,終濃度為1-10mM

融合蛋白改變了GST的構(gòu)象,影響了目的蛋白的結(jié)合力

測(cè)定pGEXGST的結(jié)合力,對(duì)載體進(jìn)行超聲處理,檢測(cè)其結(jié)合力。如果載體中GST有很高的親和力,有可能是改變?nèi)诤系鞍椎臉?gòu)象從而降低了GST標(biāo)簽蛋白的親和力。

降低結(jié)合溫度至4,充分清洗。

柱子平衡時(shí)間太短,目的蛋白不是在pH6.5-pH8.0范圍內(nèi)結(jié)合

pH6.5-pH8.0buffer進(jìn)行充分的平衡,如PBS.

目的蛋白沒(méi)有*洗脫下來(lái)

洗脫體積太少

增加洗脫液體積,減小洗脫流速。

洗脫液中谷胱甘肽濃度太低

增加洗脫液中谷胱甘肽濃度,可嘗試用50mM Tris-HCl, 20-40mM還原型谷胱甘肽pH8.0洗脫

pH影響洗脫

在不增加洗脫液中谷胱甘肽量時(shí),提高洗脫液中pHpH8-9會(huì)有改善

增加洗脫液中離子強(qiáng)度,如0.1-0.2M NaCl

洗脫液中谷胱甘肽被氧化

使用新鮮配制的洗脫液

加入DTT

非特異性疏水作用影響目的蛋白的溶解和洗脫

洗脫液中加入非離子型洗滌劑,如0.1%Triton X-100或者2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷Tween-20

電泳或western blot檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)多條帶

Mr 70000蛋白與目的蛋白一起純化下來(lái)

Mr 70000蛋白可能是大腸桿菌基因DnaK的產(chǎn)物,可以在目的蛋白中加入50mM Tris-HCl, 2mM ATP, 10mM MgSO4, pH 7.437加熱10min去除。

可通過(guò)ATP-瓊脂糖膠或離子交換來(lái)去除目的蛋白溶液中的dnaK蛋白

GST融合蛋白已經(jīng)發(fā)生降解

在裂解液中加入蛋白酶抑制劑,如加入1 mM PMSF

可能是蛋白酶對(duì)目的蛋白部分降解造成的,可使用蛋白酶缺陷型宿主菌(如lon-ompT

細(xì)胞破碎過(guò)度

減少細(xì)胞破碎時(shí)間,超聲前加入溶菌酶(菌液體積的0.110mg/ml溶菌酶,25mM Tris-HClpH8.0),避免發(fā)泡導(dǎo)致蛋白酶變性,過(guò)度超聲破碎增加宿主內(nèi)源蛋白與GST融合目的蛋白的共純化。

共價(jià)共純化

包括促進(jìn)蛋白正確折疊的分子伴侶的共純化,如:DnaK(Mr70000), DnaJ(Mr37000), GrpE(Mr 40000), GroEL(Mr57000), GroES(Mr 10000)

抗體與E. coli的各種蛋

白反應(yīng)

抗體吸附E. coli蛋白:GST-抗體;超聲處理去除GST抗體,可以用Western Blot檢測(cè)

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

價(jià)格

20507ES10

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽瓊脂糖樹(shù)脂(用于GST標(biāo)簽蛋白純化)

10ml

928.00

20507ES50

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽瓊脂糖樹(shù)脂(用于GST標(biāo)簽蛋白純化)

50ml

3848.00

20507ES60

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽瓊脂糖樹(shù)脂(用于GST標(biāo)簽蛋白純化)

100ml

6898.00

20508ES10

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速純化樹(shù)脂(用于GST標(biāo)簽蛋白純化)

10ml

1238.00

20508ES50

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速純化樹(shù)脂(用于GST標(biāo)簽蛋白純化)

50ml

4568.00

20508ES60

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速純化樹(shù)脂(用于GST標(biāo)簽蛋白純化)

100ml

7928.00

20509ES03

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1MLGST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱,1ML

1ml

328.00

20509ES08

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1MLGST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱,1ML

5×1ml

1348.00




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