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36410ES08蛋白A純化預(yù)裝柱，5ML
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 36410ES08 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：714更新時(shí)間：2022-02-10 14:17:04
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5 mL |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 36410ES08 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML
蛋白A純化預(yù)裝柱，5ML
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格（元） |
Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML 蛋白A純化預(yù)裝柱，5ML | 36410ES08 | 5 mL | 4℃ | 1848.00 |
Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML 蛋白A純化預(yù)裝柱，5ML | 36410ES25 | 5 mL×5 | 4℃ | 6838.00 |
產(chǎn)品描述
天然蛋白A（Protein A）是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁表面蛋白，與分離自G型或C型鏈球菌屬的蛋白G類(lèi)似，主要通過(guò)與免疫球蛋白（Ig）的Fc區(qū)相互作用，結(jié)合大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG，可用于多種抗體（單抗和多抗）的分離純化。在與不用的免疫球蛋白亞類(lèi)的結(jié)合特性上，Protein A 和Protein G結(jié)合性能不太一樣（詳見(jiàn)附錄1）。
本品使用的是基因改造后的蛋白A，不僅維持其本身的Ig親和特性，同時(shí)也去除了天然蛋白本身的非主要結(jié)合域以降低非特異性結(jié)合，Protein A Agarose Resin 4FF以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，重組Protein A為配基，具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性，可以在相對(duì)較高的流速下進(jìn)行抗體的純化，適用于工業(yè)客戶(hù)。利用本品經(jīng)過(guò)一步親和層析，即可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體，使用方便，應(yīng)用廣泛。
本品Protein A 4FF Chromatography Column, 5mL是一種裝填了Protein A Agarose Resin 4FF的中壓預(yù)裝柱，規(guī)格5ml，預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口，可以適配商品化的各類(lèi)中壓色譜系統(tǒng)，如ÄKTA 等，方便客戶(hù)操作。
產(chǎn)品性質(zhì)
基質(zhì)（Matrix） | 高度交聯(lián)的4%瓊脂糖微球 |
配體（Ligand） | 重組蛋白A |
孔徑（Bead size） | 45-165 µm |
大流速（Flowmax） | 0.3 MPa，3 bar |
儲(chǔ)存緩沖液（Buffer） | 含20%乙醇的1×PBS |
載量（Capacity） | ＞40 mg human IgG/mL基質(zhì) |
pH范圍（pH range） | 3-12 |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃保存，2年有效。
需準(zhǔn)備試劑
【注】：建議以下緩沖液在使用前用0.22 μm或0.45 μm濾膜過(guò)濾。
結(jié)合/洗雜緩沖液：0.15 M NaCl，20 mM Na2HPO4，pH 7.0
洗脫緩沖液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
【注】：上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和pH值，可以用結(jié)合/洗滌緩沖液對(duì)血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋?zhuān)蛘邩悠酚媒Y(jié)合/洗滌緩沖液透析。
1樣品純化（以AKTA系統(tǒng)為例）
1）準(zhǔn)備：將泵管道中注滿(mǎn)去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口，將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊。
2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲(chǔ)存液。
3）平衡：用5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。
4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1-5 mL/min，保證目的蛋白與樹(shù)脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測(cè)。
【注】：樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過(guò)柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用。
5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗，直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線(xiàn)，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。
6）洗脫：用洗脫Buffer 采用一步法或線(xiàn)性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液足夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛?lái)。也可以用一個(gè)小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來(lái)分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì)。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細(xì)菌污染。
2 SDS-PAGE檢測(cè)
將純化過(guò)程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè)，判定其純化效果。
3 樹(shù)脂清洗
隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量下降，影響柱子的性能，這時(shí)需對(duì)柱子進(jìn)行清洗：
1）去除沉淀或變性物質(zhì)
① 用2倍柱體積的6 M 鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗；
② 用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質(zhì)
① 用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗；
② 用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。
注意事項(xiàng)
1）請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2）所有操作過(guò)程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
附錄1. 蛋白A，G對(duì)不同物種Ig的結(jié)合能力總表
免疫球蛋白亞型 | Protein A | Protein G | 免疫球蛋白亞型 | Protein A | Protein G |
Human IgG | ++++ | ++++ | Mouse IgG | ++++ | ++++ |
Human IgG1 | ++++ | ++++ | Mouse IgG1 | + | ++++ |
Human IgG2 | ++++ | ++++ | Mouse IgG2a | ++++ | ++++ |
Human IgG3 | + | ++++ | Mouse IgG2b | +++ | +++ |
Human IgG4 | ++++ | ++++ | Mouse IgG3 | ++ | +++ |
Human IgM | Use anti-Human IgM | Mouse IgM | Use anti-Mouse IgM | ||
Human IgE | NR | NR | Chicken IgG (IgY) | NR | NR |
Human IgA | + | NR | Cow IgG | ++ | ++++ |
Human IgA1 | + | NR | Goat IgG | + | ++++ |
Human IgA2 | + | NR | Goat IgG1 | + | ++++ |
Human IgD | Use anti-Human IgD | Goat IgG2 | ++++ | ++++ | |
Rat IgG | + | ++ | Goat IgM | NR | NR |
Rat IgG1 | NR | + | Guinea Pig IgG | ++++ | ++ |
Rat IgG2a | NR | ++++ | Guinea Pig IgG1 | ++++ | ++ |
Rat IgG2b | NR | + | Guinea Pig IgG2 | ++++ | ++ |
Rat IgG3 | + | ++ | Hamster IgG | + | ++ |
Sheep IgG | + | ++ | Horse IgG | + | ++++ |
Sheep IgG1 | + | ++ | Rabbit IgG | ++++ | +++ |
Sheep IgG2 | + | ++ | Rabbit IgM | NR | NR |
Sheep IgM | NR | NR | Rabbit All isotypes | +++ | ++ |
Pig IgG | +++ | +++ | Monkey IgG | ++++ | ++++ |
Cat IgG | ++++ | + | Donkey IgG | ++ | ++++ |
Dog IgG | ++++ | + |
|
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|
（+）= weak binding；（++）= moderate binding；（++++）= strong binding；NR= not recommended; （-）= not tested； | |||||
附錄2 常見(jiàn)問(wèn)題與解答
問(wèn)題 | 可能原因 | 推薦解決方法 |
柱子反壓過(guò)高 | 填料被堵塞 | 清洗填料 |
裂解液中含有微笑的固體顆粒，建議上柱前使用0.22 µm/0.45 µm濾膜過(guò)濾。 | ||
樣品純化過(guò)程中曲線(xiàn)不穩(wěn) | 樣品或buffer中有氣泡 | 趕出氣泡 |
樣品和buffer進(jìn)行脫氣 | ||
洗脫組分中沒(méi)有目的蛋白 | 樣品中抗體濃度太低 | 使用其抗原做配體的介質(zhì) |
抗體被降解 | 適當(dāng)?shù)奶岣呦疵損H | |
樣品與Protein A結(jié)合力低 | 換用Protein G或Protein A/G樹(shù)脂純化 | |
回收率逐漸減低 | 上樣量太多 | 減少上樣量 |
柱子太臟，載量降低 | 清洗樹(shù)脂 |
HB190813
