Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

本品細(xì)胞/組織裂解液，WB/IP裂解液，是一種非變性條件下的裂解液，含有sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、sodium orthovanadate和leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解，并能維持原有的蛋白間的相互作用。裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、IP和Co-IP等實(shí)驗(yàn)。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。

-20℃保存，一年有效。盡量避免反復(fù)凍融，建議分裝后使用。

注意事項(xiàng)

1）需自備PMSF。

2）裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

3） 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定其蛋白濃度（YEASEN CAT NO.20201ES76）。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：

(一) 細(xì)胞樣品

1）融解WB/IP裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。

2）貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液清洗細(xì)胞一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成5×10⁵～1×10⁶個(gè)細(xì)胞/管，然后再裂解。因?yàn)榇髨F(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分。

3）充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150μl或200μl。

（二）組織樣品：

1）把組織|剪切成細(xì)小的碎片。

2）融解WB/IP裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。

3）按照每20mg組織加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

4）用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5）充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6）如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。

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