Calcium Phosphate Cell Transfection Kit

磷酸鈣法細胞轉染試劑

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

磷酸鈣法轉染DNA是基于形成磷酸鈣-DNA沉淀的原理：磷酸鈣可促使細胞膜和DNA的結合，之后通過細胞內(nèi)吞的作用將外源DNA轉入目的細胞。該方法曾被用于多種細胞系的轉染。翌圣生物的磷酸鈣法細胞轉染試劑是在傳統(tǒng)磷酸鈣法的基礎上經(jīng)過特別優(yōu)化，不僅在轉染效率有了較大提高，且降低了細胞毒性，特別適合于293或293T細胞的轉染，對其他大多數(shù)常見細胞如Hela、CHO也具有較好的轉染效果，不僅適用于細胞的瞬時轉染，且適用于穩(wěn)轉株的篩選。

本品為無菌包裝，可直接使用。

產(chǎn)品組分

運輸和保存方法

冰袋運輸。-20 ℃保存，有效期1年。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）高純度的質(zhì)粒是獲得高轉染效率的必要條件，確保A260/A280＞1.8，且電泳檢測抽提到的質(zhì)粒90%以上都是超螺旋。

3）在用磷酸鈣法轉染細胞時應使用濃度不高于5%的CO₂，CO₂的最佳濃度為3%左右。

4）BBS溶液的pH值直接關系到轉染效率，盡量避免把BBS溶液長時間暴露在空氣中，以免被空氣中的CO₂酸化。

5）轉染時由于質(zhì)粒、細胞不同，最佳的質(zhì)粒用量需自行摸索。

使用說明

1.  對于貼壁細胞（以6孔板為例）

① 轉染前一天（20-24 h），胰酶消化細胞并計數(shù)，細胞鋪板，使其在轉染時密度為70-90%。

② 在轉染前30-60 min，吸去細胞培養(yǎng)液，加入新鮮的*培養(yǎng)液（不含抗生素）2 mL。

【注】：轉染時最好使用新鮮配制的培養(yǎng)液；轉染用的培養(yǎng)液可以在配制后分裝凍存，使用時再解凍。

③ 取2-6 µg待轉染的質(zhì)粒DNA（質(zhì)?？傮w積不宜超過20 µL），加入到100 µL CaCl₂溶液中，充分混勻。

④ 把DNA- CaCl₂溶液加入到100 µLBBS溶液中，混勻，室溫孵育10-20 min。此時不會產(chǎn)生可見的沉淀。

【注】：該步驟順序不能反，需把DNA- CaCl₂溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA- CaCl₂溶液中。

⑤ 把DNA- CaCl₂-BBS混合物均勻滴加到整個6孔板內(nèi)。5% CO₂，37℃培養(yǎng)細胞。

⑥ 根據(jù)實驗要求和磷酸鈣對于不同細胞的毒性不同，在4-16 h后輕輕晃動培養(yǎng)板數(shù)次以充分懸浮一些磷酸鈣沉淀，吸去含磷酸鈣沉淀的培養(yǎng)液，加入2 mL新鮮的*培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

⑦ 通常在轉染約24 h后就可以檢測到轉染基因的表達。

2.  對于懸浮細胞（以6孔板為例）

① 離心收集懸浮細胞，用PBS洗滌一次。

② 按照上面的步驟③和④制備DNA- CaCl₂-BBS混合物。

③ 每10⁶個細胞的沉淀，用100 µL DNA- CaCl₂-BBS混合物重新懸浮，室溫放置20 min。

④ 在一個6孔板孔內(nèi)加入2 mL*培養(yǎng)液（不含抗生素），然后加入來自上一步的細胞-DNA- CaCl₂-BBS混合物，混勻。

⑤ 5% CO₂，37℃培養(yǎng)細胞。

⑥ 根據(jù)實驗要求和磷酸鈣對于不同細胞的毒性不同，在4-16 h后離心收集細胞，用PBS洗一次，然后用2 mL*培養(yǎng)液重新懸浮細胞，繼續(xù)培養(yǎng)。

⑦ 通常在轉染約24小時后就可以檢測到轉染基因的表達。

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