Hieff TransTM Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent

Hieff TransTM懸浮細胞脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

Hieff TransTM懸浮細胞脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，經(jīng)優(yōu)化專門用于懸浮細胞的轉(zhuǎn)染，且適用于DNA、RNA和寡核苷酸的轉(zhuǎn)染，對大多數(shù)真核細胞具有很高的轉(zhuǎn)染效率。

Hieff TransTM懸浮細胞脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑以無菌的液體形式提供。

運輸與保存方法

冰袋（wet ice）運輸。產(chǎn)品4oC保存，一年有效。不可冷凍！

注意事項

1. 為得到*的轉(zhuǎn)染效率，請先用無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋Hieff TransTM Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent（以下簡稱Hieff TransTM），之后與DNA或RNA做混合。

2. 使用高質(zhì)量的DNA或RNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率，務(wù)必確保質(zhì)粒的高純度和無菌狀態(tài)，*去除質(zhì)粒提取過程中可能殘留的苯酚和高鹽，因為上述酚類會對細胞造成損失，而高鹽分會干擾“Hieff TransTM-復(fù)合物"的形成。質(zhì)粒中的內(nèi)毒素也是轉(zhuǎn)染的大敵，務(wù)必去除。

3. 轉(zhuǎn)染時培養(yǎng)基中不能添加抗生素。

4. 陽離子脂質(zhì)體應(yīng)該在4℃保存，要注意避免多次反復(fù)長時間開蓋，因為可能會導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。

5. 需優(yōu)化DNA濃度和陽離子脂質(zhì)體試劑量以得到zui大的轉(zhuǎn)染效率。DNA和Hieff TransTM的比例，通常推薦是1:2 或者1:3。

推薦轉(zhuǎn)染條件（以293懸浮培養(yǎng)細胞，質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染為例）

zui終轉(zhuǎn)染體積：30ml

轉(zhuǎn)染細胞數(shù)目：3×107 cells（zui終細胞密度：1×106 cells/ml），轉(zhuǎn)染之前需要確保細胞健康，細胞活力>90%。

質(zhì)粒DNA量：20–40 μg (typically use 30 μg)

轉(zhuǎn)染試劑量：40–80 μL (typically use 60 μL). Use 2 μL Hieff TransTM per 1 μg of plasmid DNA transfected.

操作步驟（293懸浮細胞）

使用以下步驟在30ml總體系內(nèi)轉(zhuǎn)染293細胞，轉(zhuǎn)染過程中生長培養(yǎng)基內(nèi)不要添加抗生素，否則會降低轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染過程請同時設(shè)置陽性對照組和陰性對照組（無DNA，無Hieff TransTM）。

【注】對于其他的培養(yǎng)總體系，按比例放大或者縮小各組分用量。

1. 轉(zhuǎn)染當(dāng)天，在配制復(fù)合物之前，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染需要的細胞量【見上推薦轉(zhuǎn)染條件，即28ml 生長培養(yǎng)基內(nèi)加入3×107 cells，臺盼藍排斥法確定細胞活力和小量細胞成團量。劇烈漩渦混勻45s以打破細胞團，并用計數(shù)器測定總細胞量。細胞活力需>90%?！?【注】：為了達到*效率，確保單細胞懸液。

2. 按照以下方法配制Hieff TransTM-DNA復(fù)合物，

a, 用無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEM I）稀釋30μg質(zhì)粒DNA，使其終體積為1ml；

b, 用無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEM I）稀釋60μl Hieff TransTM，使其終體積為1ml；輕輕混勻，于室溫孵育5min；【注意】：過長時間孵育會降低效率。

c, 孵育5min之后，將稀釋的質(zhì)粒DNA加入稀釋的Hieff TransTM，使其總體積為2ml。輕輕混勻。

d, 室溫孵育20-30min，使得DNA-Hieff TransTM復(fù)合物形成。此時溶液可能會混濁，但不會影響轉(zhuǎn)染。

【注意】：DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物室溫至少穩(wěn)定保存5h。

3. 孵育*后，將2ml DNA-Hieff TransTM復(fù)合物加入28ml 含293懸浮細胞的生長培養(yǎng)基內(nèi)，使得細胞zui終的密度約為1×106 cells/ml。對于陰性對照，用2ml無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEM I）替換。

4. 37℃，8% CO2軌道搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速125rpm，直至進行轉(zhuǎn)基因表達分析，無需去掉復(fù)合物或更換培養(yǎng)基。然而，可能有必要在4-6h后更換生長培養(yǎng)基，不會降低轉(zhuǎn)染活性。

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