HB161219

Immunohischemistry Kit for Rabbit Primary Antibody

兔免疫組化（IHC）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

翊圣IHC Kit for Rabbit Primary Antibody可用于檢測(cè)以兔單克隆或多克隆抗體為一抗的免疫組化實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)原理基于高特異性高親和力的鏈霉親和素-生物素結(jié)合：已固定或培養(yǎng)細(xì)胞的抗原與一抗形成抗原抗體復(fù)合物，生物素化二抗特異性結(jié)合上述復(fù)合物，經(jīng)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素特異性識(shí)別生物素（即抗原所在位置），zui后經(jīng)辣根過(guò)氧化物酶底物顯色即可檢測(cè)相應(yīng)抗原。

本品可適用于多種類型樣本，如石蠟包埋切片、冰凍切片、培養(yǎng)細(xì)胞涂片及血液標(biāo)本等。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。4℃保存，有效期1年。勿冰凍！

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）DAB是一潛在致癌物，使用時(shí)請(qǐng)注意自我防護(hù)。

3）檢測(cè)樣本時(shí)需同時(shí)做陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。

準(zhǔn)備試劑

1）二甲苯、乙醇、甲醇

2）去離子水

3）30%過(guò)氧化氫溶液（Cat# 36216）

4）1×PBS, PH7.4（Cat#60145）

5）蘇木素染色液（Cat#60502）

6）封片劑（Cat#36313）

使用方法

1 樣品準(zhǔn)備

染色前用PBS浸泡組織或細(xì)胞涂片10min。石蠟切片于室溫下用二甲苯常規(guī)脫蠟、入水、抗原修復(fù)。

【注】：從此步驟起，嚴(yán)禁標(biāo)本或組織切片干燥。

2 染色（以石蠟切片為例）

1）將處理好的石蠟切片放入3% H2O2-甲醇溶液中浸泡10min，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶的作用。

2）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。

3）封閉：加一滴封閉液于組織切片上（需*覆蓋待檢組織）孵育10min。

4）倒掉或吸干液體（不要沖洗）。

5）一抗孵育：每張切片加2滴（100μl）或適量一抗（需*覆蓋待檢組織），濕盒內(nèi)孵育30-60min。

6）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。

7）二抗孵育：每張切片加一滴生物素標(biāo)記抗兔二抗（需*覆蓋待檢組織），孵育10min。

8）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。

9）酶孵育：每張切片加一滴HRP標(biāo)記鏈霉親和素（需*覆蓋待檢組織），孵育10分鐘。

10）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。

11）制備DAB顯色液。

按照【20×DAB濃縮液：20×H2O2濃縮液：20×DAB底物緩沖液：水=1:1:1:20】的比例進(jìn)行配制顯色液，以1張切片為例，分別吸取上述3種溶液各2.5µl溶于50µl去離子水中，充分混勻即可。

【注】：① DAB顯色液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避光放置，且在30min內(nèi)使用。

② 可根據(jù)需要一次染多張切片，各種試劑量按照上述比例放大即可。

12）顯色：向切片上滴加一滴上述DAB顯色液，室溫顯色2-5min（此步可在顯微鏡下控制顯色程度）。

13）自來(lái)水充分沖洗。

14）用合適復(fù)染劑復(fù)染，鹽酸酒精分化。

15）繼續(xù)后續(xù)脫水、透明、封片、鏡檢。

3 結(jié)果判定

陽(yáng)性結(jié)果處顯處染棕黃或棕褐色。

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