聯(lián)系電話
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級會員·13年
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 聯(lián)系人：
- 曹女士
- 電話：
- 400-6111-883
- 手機：
- 售后：
- 4006-111-883
- 傳真：
- 86-21-34615995
- 地址：
- 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號3樓
- 網址：
- www.yeasen.com
掃一掃訪問手機商鋪
產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 12202ES08 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業(yè),制藥 |
產品介紹
Hieff NGS® Ultima Pro PCR Free DNA Library Prep Kit 全能型DNA建庫試劑盒(PCR-Free)
產品描述
Hieff NGS® Ultima Pro PCR Free DNA Library Prep Kit全能型DNA建庫試劑盒(PCR-Free)是針對Illumina®高通量測序平臺專業(yè)開發(fā)設計的新一代PCR Free版建庫試劑盒。本產品采用高質量的酶學組成，在前一代建庫試劑盒的基礎上，改進了DNA片段末端修復和加A效率，同時改善接頭連接效率?？蓱糜诔Ｒ?guī)動植物基因組、微生物基因組、FFPE、cfDNA、ChIP DNA等樣本，助力獲得優(yōu)異的測序數據。
1.適用500 pg-500 ng所有DNA樣本，包含cfDNA、FFPE等
2.文庫轉化率，最高可達70%以上
3.多樣本驗證可獲得優(yōu)異的文庫與測序數據
4.嚴格的批次性能與穩(wěn)定性質控
產品組分
運輸與保存方法
干冰運輸。所有組分-20 °C保存，有效期1年。
注意事項
一、關于操作
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 請于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后上下顛倒數次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。
3. 配制各步驟反應液時推薦使用移液器吹打混勻或輕輕振蕩，劇烈振蕩可能會造成文庫產出下降。
4. 為避免樣品交叉污染，推薦使用帶濾芯的槍頭，吸取不同樣品時請更換槍頭。
5. 推薦在帶熱蓋的PCR儀中進行各步驟反應，使用前應預熱PCR儀至反應溫度附近。
6. PCR產物因操作不當極容易產生氣溶膠污染，進而影響實驗結果準確性。推薦將PCR反應體系配制區(qū)和PCR產物純化檢測區(qū)進行強制性的物理隔離；使用專用的移液器等設備；并定時對各實驗區(qū)域進行清潔（使用0.5%次氯酸鈉或10%漂白劑進行擦拭清理），以保證實驗環(huán)境的潔凈度。
7. 本產品僅作科研用途！
二、關于DNA片段化
1. 本試劑盒中兼容機械法及酶切法片段化的DNA。
2. 本試劑盒兼容范圍為500 pg - 500 ng Input DNA。應盡可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高質量Input DNA。表1中列舉了將本試劑盒應用于常見應用中推薦的Input DNA量。
表1.常見應用中推薦Input DNA量
應用 | 樣本類型 | 推薦Input DNA量 |
全基因組測序 | 復雜基因組 | 50 ng-500 ng |
靶向捕獲測序 | 復雜基因組 | 10 ng-500 ng |
全基因組測序，靶向捕獲測序 | FFPE DNA | 50 ng-500 ng |
全基因組測序，靶向捕獲測序 | cfDNA/ctDNA | ≥500 pg |
全基因組測序 | 微生物基因組 | ≥1 ng |
全基因組測序PCR-free測序 | 高質量DNA | ≥50 ng |
【注】：上表為使用高質量DNA時推薦的Input DNA量，當Input DNA質量較差或需要進行片段分選時，應適當上調使用量。
3. Input DNA特指投入末端修復/dA尾添加步驟中的DNA。
4. Input DNA制備過程中帶入的高濃度金屬離子螯合劑或其他鹽，可能會影響末端修復/dA尾添加步驟反應效率，建議DNA片段化后進行磁珠純化或分選。當使用機械法進行DNA片段化且產物不進行純化或長度分選而直接建庫時，請將DNA稀釋在TE Buffer中進行片段化，請勿在滅菌超純水中進行。當使用酶切法進行片段化且產物不進行純化或長度分選而直接建庫時，請確認Stop Buffer中不包含過量的金屬離子螯合劑。如條件不滿足，可先將片段化產物純化或長度分選后溶于TE buffer或滅菌超純水中（≤50 μL)，再進行文庫構建。
三、關于接頭連接（Adapter Ligation)
1. 針對Illumina®測序平臺，Yeasen提供48種Barcoded Adapters: Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1~Set 4 (Cat#12615~Cat#12618)；單端 96種 Index Primers: Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina®, Set 1~Set 2 (Cat#12611~Cat#12612)；雙端384 種UDI Primers: Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (Cat#12404~Cat#12407)。
2. Adapter的質量和使用濃度直接影響連接效率及文庫產量。Adapter用量過高可能會產生較多Adapter Dimer；用量較低可能會影響連接效率及文庫產量。表2列舉了使用本試劑盒，不同Input DNA量推薦的Adapter使用量。
表2.500 pg-1 μg Input DNA推薦的Adapter使用濃度
Input DNA | Adapter : Input DNA摩爾比 | Input DNA | Adapter : Input DNA摩爾比 |
1 μg | 10:1 | 50 ng | 100:1 |
500 ng | 20:1 | 25 ng | 200:1 |
250 ng | 40:1 | 1 ng | 200:1 |
100 ng | 100:1 | 500 pg | 400:1 |
【注】：Input DNA摩爾數 (pmol)≈ Input DNA質量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度 (bp)]。
四、關于磁珠純化與分選 (Bead-based Clean Up and Size Selection)
1. DNA片段長度分選步驟可選擇在末端修復/dA尾添加之前，或接頭連接后，或文庫擴增后進行。
2. 當Input DNA質量≥50 ng，您可選擇在接頭連接后分選；如Input DNA質量<50 ng，建議您在文庫擴增后進行分選。
3. Ligation Enhancer中包含高濃度的PEG，會對雙輪磁珠分選產生顯著影響。因此，如在接頭連接后進行長度分選，必須先進行純化步驟，再進行雙輪分選步驟?。蝗缭谀┒诵迯?dA尾添加之前或文庫擴增后進行長度分選，可直接進行雙輪磁珠分選步驟。
4. 磁珠使用前應先平衡至室溫，否則會導致得率下降、分選效果不佳。
5. 磁珠每次使用前都應充分振蕩混勻或使用移液器上下吹打充分混勻。
6. 轉移上清時，請勿吸取磁珠，即使微量殘留都將影響后續(xù)文庫質量。
7. 磁珠漂洗使用的80%乙醇應現(xiàn)用現(xiàn)配，否則將影響回收效率。
8. 進行長度分選時，初始樣品體積應盡量≥100 μL，不足時請用超純水補齊。以防因樣品體積太小導致移液誤差增大。
9. 產物洗脫前應將磁珠置于室溫干燥。干燥不充分容易造成無水乙醇殘留影響后續(xù)反應；過分干燥又會導致磁珠開裂進而降低純化得率。通常情況下，室溫干燥3-5 min足以讓磁珠充分干燥。
10. DNA純化或長度分選產物如需保存，可使用TE Buffer洗脫，產物可于4 °C可保存1-2周，-20 °C可保存1個月。
五、關于文庫質檢 (Library Quality Analysis)
1. 通常情況下，構建好的文庫可通過長度分布檢測和濃度檢測來進行質量評價。
2. 文庫濃度檢測可使用：基于雙鏈DNA熒光染料的方法，如Qubit®、PicoGreen®等；基于qPCR絕對定量的方法。
3. 文庫濃度檢測不可使用：基于光譜檢測的方法，如NanoDrop®等。
4. 推薦使用qPCR方法進行文庫濃度檢測：Qubit®、PicoGreen®等基于雙鏈DNA熒光染料的濃度測定方法時，無法有效區(qū)分單端連接Adapter的產物、兩端均未連接Adapter的產物以及其他不完整雙鏈結構產物；qPCR絕對定量基于PCR擴增原理，僅定量樣品中兩端Adapter完整的文庫（即可測序的文庫），可排除單端或雙端都不連接Adapter的不可測序文庫的干擾。
5. 文庫長度分布檢測，可通過Agilent Bioanalyzer 2100等基于毛細管電泳或微控流原理的設備進行檢測。
