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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 100UL |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10149ES01 | 應用領域 | 生物產業(yè) |
產品介紹
2×Hieff Canace® 高保真酶預混液信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預混液 | 10149ES01 | 100 μL | 93.00 |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預混液 | 10149ES03 | 1 mL | 553.00 |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預混液 | 10149ES08 | 5×1 mL | 1453.00 |
| 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預混液 | 10149ES50 | 50×1ml | 11655.00 |
| 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預混液 | 10149ES60 | 100×1ml | 21655.00 |
2×Hieff Canace® 高保真酶預混液描述
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶預混液是即用型2×預混合溶液，包含Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系。預混液中添加了Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase的熱啟動因子，極大提高了擴增的檢出率和產物的特異性。預混液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴增能力，擴增目的片段的長度可長達10 kb，該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。擴增速度可達15 sec/kb。適用于復雜模板的擴增，擴增產物為平末端。
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，反應體系只需加入引物和模板即可，并可以通過兩步法的程序進行擴增，簡化了實驗步驟，節(jié)省了時間。本產品中不含染料，PCR產物需加入Loading buffer后進行電泳。另外，該產品還含有特異保護劑，使得預混液反復凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。
產品應用
基因克??；復雜DNA模板擴增；高通量建庫。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃保存。有效期2年。
注意事項
1）解凍后Master Mix可能出現晶體沉淀，使用前務必渦旋振蕩混勻至沉淀消失，不影響試劑性能。
2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
3）本產品僅作科研用途！
推薦PCR反應體系（冰上配制）
組分 | 體積 | 終濃度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
DNA模板 | 適量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix | 25 μL | 1× |
【注】：
1）聚合酶終濃度：在1×預混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反應體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM，推薦0.5 μM。
3）Mg2+、dNTP終濃度：在1×預混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應體系）：
模板種類 | 擴增片段1 kb-10 kb |
基因組DNA | 50 ng-200 ng |
質?；虿《綝NA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超過PCR反應總體積的1/10) |
PCR擴增程序：有以下三種程序可選擇，優(yōu)先選擇兩步法程序。
兩步法程序（優(yōu)先推薦）：
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
預變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
延伸 | 68℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
三步法程序（常規(guī)程序）：
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
預變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火 | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
梯度溫度退火程序（難擴增基因推薦程序）:
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
預變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 15，每個循環(huán)降低1℃ |
梯度退火 | 70-55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
變性 | 98℃ | 10 sec | 20 |
正常退火 | 55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：
1）預變性溫度和時間：推薦溫度：98℃，時間：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦溫度：60℃，也可根據需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設置為20 sec，可以在10-30 sec內調節(jié)。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時間：推薦溫度：72℃。時間：30 sec/kb，復雜模板根據實際情況可延長至60 sec/kb。
4）擴增產物：請將PCR擴增產物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴增產物。擴增產物為平末端。
5）不同擴增程序下的特點：
程序類型 | 兩步法 | 三步法 | 梯度退火 |
速度 | 最快 | 中等 | 慢 |
特異性 | 高 | 中等 | 高 |
PCR產量 | 中等 | 最高 | 中等 |
檢出率 | 高 | 中等 | 高 |
相關產品
產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶 | 10148ES60/76/80 | 100/500/1000 U |
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