產(chǎn)品信息
 

產(chǎn)品描述
 

      MBPSep Dextrin Agarose Resin是一種純化帶有麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）標(biāo)簽蛋白的親和層析介質(zhì)，MBP可促進(jìn)連接蛋白的正確折疊，增加在細(xì)菌中過(guò)量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步純化MBP融合蛋白，結(jié)合的融合蛋白可以用10 mM麥芽糖進(jìn)行溫和洗脫，保護(hù)了目的蛋白的活性，MBP融合部分后續(xù)可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。
此外，MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，具有更高的物理化學(xué)特性，可以耐受更高的壓力，在相對(duì)較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化，更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。

MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML是裝填了MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF的一種中壓預(yù)裝柱，規(guī)格1 mL，預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如ÄKTA等，方便客戶操作。

產(chǎn)品性質(zhì)
 

運(yùn)輸和保存方法
 

冰袋運(yùn)輸。4℃保存，有效期2年。

需準(zhǔn)備試劑

所用水和Buffer在使用前*用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾除菌。

結(jié)合/洗雜緩沖液：20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA,  pH 7.4

洗脫緩沖液：20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA，10 mM 麥芽糖, pH 7.4

注：結(jié)合/洗雜緩沖液或者洗脫緩沖液中可加入1 mM DTT或10 mM β-巰基乙醇。

使用方法
 

注：樣品在上樣前*用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)以防阻塞柱子。

1樣品純化（以Akta為例）

1）準(zhǔn)備：將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口，將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊。

2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲(chǔ)存液。

3）平衡：用5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。
4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1 mL/min，保證目的蛋白與樹(shù)脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測(cè)。
注：樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過(guò)柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用。
5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗，直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液，待檢測(cè)。
6）洗脫：用洗脫Buffer采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液足夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛?lái)。也可以用一個(gè)小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來(lái)分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì)。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被細(xì)菌污染。

2 SDS-PAGE檢測(cè)
 

將純化過(guò)程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè)，判定其純化效果。

3 填料清洗
 

隨著非特異結(jié)合蛋白的增多和蛋白的聚集，會(huì)造成流速和結(jié)合載量性能下降，此時(shí)需對(duì)填料進(jìn)行清洗。

1）3倍柱體積的去離子水；

2）3倍柱體積的0.1%SDS或0.5 M NaOH溶液；

3）3倍柱體積去離子水；

4）3倍柱體積20%乙醇，保存于4℃。

注意事項(xiàng)
 

附表 問(wèn)題及解決方案
 

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