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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 12253ES |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業(yè) |
產品介紹
Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) 核糖體RNA去除試劑盒(人/小鼠/大鼠)
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格/元 |
Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) 核糖體RNA去除試劑盒(人/小鼠/大鼠) | |||
12253ES24 | 24 T | 11363.00 | |
12253ES96 | 96 T | 37363.00 |
產品描述
Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat)利用RNase H消化法去除人、小鼠、大鼠總RNA中的核糖體RNA以保留信使RNA（mRNA）和其它非編碼RNA。該試劑盒對于完整和部分降解的總RNA（如FFPE RNA）均具有良好的rRNA去除效果。經rRNA去除所獲得的RNA樣本可用于高通量測序分析mRNA和非編碼RNA，可顯著提高測序結果中有效數據比例，也可用于cDNA合成或其它下游應用。
適用范圍
適用于人、小鼠、大鼠來源的100 ng~1 μg 總RNA樣品；適用于完整或部分降解RNA（如FFPE RNA）樣品。
產品組分
運輸與保存方法
干冰運輸，-20°C存放。
注意事項
1. 請使用無RNase污染的耗材，并對實驗區(qū)域定期進行清理，推薦使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。
2. RNA樣品應不含基因組DNA污染，若樣品中有gDNA殘留，應先進行DNase I消化并純化后再用于本試劑盒。
3. RNA樣品大投入體積為11 μL，若樣品體積較大，可先進行濃縮。
自備材料
1. RNA純化磁珠：Hieff NGS® Cleaner（Cat#12602）或其他等效產品。
2. qRT-PCR質檢rRNA去除效率：Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) （Cat#11201）或其他等效產品；
3. 其他材料： 無水乙醇、無菌超純水、低吸附槍頭、PCR管、磁力架、PCR儀等。
操作步驟
1. 探針雜交
1.1 將探針和雜交Buffer從-20 °C 取出，解凍后顛倒混勻，置于冰上備用。
1.2 準備RNA樣品：根據投入量和樣品濃度，計算RNA取樣體積，用Nuclease free H2O稀釋至11 μL。
1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反應體系。
表 1 探針雜交反應體系
名稱 | 體積（μL） |
Hybridization Buffer | 3 |
Probe Mix(H/M/R) | 1 |
Total RNA | 11（100 ng~1 μg） |
Total | 15 |
1.4 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底。
1.5 將上述 PCR 管置于PCR儀中，按照表2所示反應程序，進行探針雜交反應。
表 2 探針雜交反應程序
溫度 | 時間 |
熱蓋105°C | On |
95℃ | 2 min |
95℃-22℃ | 0.1℃/s |
22℃ | 5 min |
4℃ | hold |
2. RNase H消化
2.1將RNase H消化試劑從-20 °C取出，解凍后顛倒混勻，置于冰上備用。按照表 3 所示，配制RNase H消化反應體系。
表3 RNase H消化反應體系
名稱 | 體積（μL） |
RNase H Buffer | 3 |
RNase H | 2 |
上步產物 | 15 |
Total | 20 |
2.2 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底。
2.3 將上述 PCR 管置于PCR儀中，設置反應程序：37℃，30 min； 4℃，hold，進行RNase H消化反應。
3. DNase I 消化
3.1將DNase I消化試劑從-20 °C 取出，解凍后顛倒混勻，置于冰上備用。按照表4所示，配制DNase I消化反應體系。
表4 DNase I消化反應體系
名稱 | 體積（μL） |
DNase I Buffer | 27.5 |
DNase I | 2.5 |
上步產物 | 20 |
Total | 50 |
3.2 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底。
3.3 將上述 PCR 管置于PCR儀中，設置反應程序：37℃，30min； 4℃，hold，進行DNase I消化反應。
4. RNA純化
4.1 準備工作：將 Hieff NGS® RNA Cleaner （Cat#12602）磁珠由冰箱中取出，室溫平衡至少 30 min。用Nuclease free H2O配制 80%乙醇。
4.2 渦旋振蕩或充分顛倒磁珠以保證充分混勻。
4.3 吸取 110 μL Hieff NGS® RNA Cleaner（2.2×，Beads:DNA=2.2:1）至上一步產物中，移液器充分吹打混勻，室溫孵育 5 min。
4.4 將PCR管置于磁力架中分離磁珠和液體，待溶液澄清后（約3 min），小心移除上清。
4.5 保持PCR管始終置于磁力架中，加入 200 μL Nuclease free H2O新鮮配制的80%乙醇漂洗磁珠，室溫孵育 30 sec 后，小心移除上清。
4.6 重復步驟 4.5，總計漂洗兩次。用 10 μL移液器吸干凈殘留液體。
4.7 保持 PCR 管始終置于磁力架中，室溫下開蓋干燥磁珠（5~10 min）。
4.8 RNA洗脫：將PCR 管從磁力架上取下，加入 11 μL Nuclease free H2O（或使用適合下游實驗的相應體積Nuclease free H2O或洗脫緩沖液），使用移液器輕輕吹打至充分混勻，室溫靜置 5 min。
4.9將 PCR管短暫離心并置于磁力架中靜置，待溶液澄清后（約3 min），小心移取 10 μL 上清（可根據步驟4.7選擇的實際洗脫體積進行相應調整）至新的Nuclease free PCR 管中。
【注】洗脫后的樣品請立即進行下游實驗，或置于-80℃存放。
案例展示
qPCR驗證: 以1μg 293T RNA進行rRNA去除，利用qPCR對比去除前后rRNA基因和mRNA基因的表達量變化。
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