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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年
快速片段化/末端修復(fù)/A尾添加模塊
| 參考價(jià): | ￥ 1462 |
| 訂貨量: | 1 件 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：1305更新時(shí)間：2023-02-22 15:26:05
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 24T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 12609ES24 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent 快速片段化/末端修復(fù)/A尾添加模塊 | 12609ES24 | 24 T | 1462 |
12609ES96 | 96 T | 5362 | |
12609ES98 | 1000T | - |
產(chǎn)品描述
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent快速片段化/末端修復(fù)/A尾添加模塊是針對(duì)Illumina®與MGI®高通量測(cè)序平臺(tái)設(shè)計(jì)的新一代酶切法建庫(kù)試劑。本品采用高質(zhì)量的片段化酶，擺脫了繁瑣的超聲過(guò)程，同時(shí)簡(jiǎn)化了操作流程，將片段化模塊與末端修復(fù)/加A模塊合二為一，極大的降低了建庫(kù)的時(shí)間和成本?？蓱?yīng)用于500 pg-1 μg常規(guī)動(dòng)植物基因組、微生物基因組等樣本，在單管內(nèi)實(shí)現(xiàn)DNA的片段化、末端修復(fù)和A尾添加反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)物無(wú)需純化，即可使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）或Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module（Cat#12604）進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建中接頭連接反應(yīng)。
產(chǎn)品組分
組分編號(hào) | 組分名稱 | 24 T | 96 T | 1000T |
12609 | Smearase® Mix | 240 μL | 960 μL | 10mL |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。
-20℃保存，有效期1年。
注意事項(xiàng)
1）本試劑盒兼容范圍為500 pg – 1 μg Input DNA。應(yīng)盡可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高質(zhì)量Input DNA。
2）若Input DNA中引入高濃度金屬離子螯合劑或其他鹽，可能會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)，建議將DNA稀釋在ddH2O或不含EDTA的10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中進(jìn)行片段化。
3）對(duì)于常規(guī)的高質(zhì)量基因組DNA，酶切時(shí)間參考表1。本試劑盒片段化偏好低，耐受各種GC含量的模板。
表1 常規(guī)基因組DNA段化時(shí)間推薦表
插入片段主峰大小 | 片段化時(shí)間 | 優(yōu)化范圍 |
600 bp | 5 min | 3-8 min |
350 bp | 8 min | 5-12 min |
250 bp | 10 min | 8-15 min |
200 bp | 13 min | 10-20 min |
150 bp | 20 min | 12-25 min |
【注】：以上為推薦時(shí)間，需客戶在自己的實(shí)驗(yàn)體系中進(jìn)行微調(diào)，以達(dá)到最佳效果。
4）參照片段化步驟推薦條件可將DNA酶切為所需大小，為保證優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的片段化效果，片段化過(guò)程請(qǐng)于冰上操作。
5）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
6）本產(chǎn)品僅用作科研用途！
使用方法
DNA段化/末端修復(fù)/dA尾添加（DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing）
該步驟將基因組DNA段化，同時(shí)進(jìn)行末端修復(fù)及dA尾添加。
1. 將表2中試劑解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。
2. 于冰上配制表2反應(yīng)體系。
表2 DNA段化/末端修復(fù)/dA尾添加 PCR反應(yīng)體系
名稱 | 體積（μL） |
Input DNA | x |
Smearase® Mix | 10 |
ddH2O | Up to 60 μL |
3. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液離心至管底。
4. 將上述PCR管置于PCR儀，設(shè)置表3所示反應(yīng)程序，進(jìn)行DNA段化，末端修復(fù)及dA尾添加反應(yīng)。
表3 DNA段化/末端修復(fù)/dA尾添加 PCR反應(yīng)程序
溫度 | 時(shí)間 |
熱蓋105°C | On |
4 °C | 1 min* |
30 °C | 3-20 min** |
72 °C | 20 min |
4 °C | Hold |
【注】：*DNA段化過(guò)程為有效控制片段化效果，避免過(guò)度酶切，反應(yīng)程序可預(yù)先設(shè)置4℃，待模塊溫度降至4℃時(shí)，將PCR管放入PCR儀即可。**對(duì)于完整的基因組DNA，酶切時(shí)間參考表1。
5. 產(chǎn)物如需純化，可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效產(chǎn)品。也可以直接駁接Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module（Cat#12604）或Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）試劑盒，進(jìn)行接頭連接。詳細(xì)說(shuō)明請(qǐng)見(jiàn)后者的說(shuō)明書(shū)。
參考實(shí)例
使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent對(duì)小牛胸腺gDNA樣本進(jìn)行酶切，片段化結(jié)果見(jiàn)圖1。
圖1 Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent酶切800 ng小牛胸腺gDNA樣本（不同酶切時(shí)間片段化效果檢測(cè)）
HB220118
