4×Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Mix

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

4×Hifair^® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Mix是以RNA為模板進行多重定量PCR反應的預混合溶液。在實驗的過程中，逆轉錄和定量PCR在同一反應管中進行，簡化了實驗操作，降低了污染的風險。

本品利用耐熱Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第—鏈cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase進行定量擴增。除上述酶外，預混液還含有dNTPs、Mg²⁺等，并添加了有效抑制非特異性PCR擴增的因子和提升多重qPCR反應擴增效率的因子，能夠在保證引物擴增效率的同時，進行多達四重的反應。

產(chǎn)品組分

【注】 a) 4×Hifair^® V MP Mix主要包含的酶有Hifair^® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

b) 不含Rox reference dye。如需，推薦使用貨號10200ES產(chǎn)品。

適用機型

ABI系列：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Bio-Rad系列：Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Roche系列：Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

其他系列：Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.

運輸與保存方式

冰袋運輸。-20℃保存，有效期6個月。本品避免反復凍融。建議分裝保存。

注意事項

1. 實驗過程中請使用RNase free耗材。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

反應體系（以25 μL體系為例說明）

【注】：使用前務必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。

a) 引物和探針濃度：Primer/Probe Mix中包含多對引物和探針，通常每條引物終濃度為0.4 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM間進行調(diào)整；每條探針的濃度可根據(jù)具體情況在50-300 nM間調(diào)整。

b) 模板稀釋：qPCR靈敏度*，建議將模板進行稀釋使用，控制Ct值在在20-35之間適宜。

c) 反應體系：推薦使用25 μL、30 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。

d) 體系配制：請于超凈工作臺內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。

標準擴增程序

【注】                                                                                             

a) 逆轉錄：42℃或者50℃均可，時間10-15 min。

b) 擴增反應：擴增反應溫度根據(jù)設計的引物Tm值進行調(diào)整。CDC*推薦的ORF1ab和N引物，退火溫度建議≥60℃。

c) 熒光信號采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同，請根據(jù)短時間限制進行設置。

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