產(chǎn)品信息
 

產(chǎn)品描述
 

LDL是由極低密度脂蛋白（VLDL）轉(zhuǎn)變而來，主要功能是把膽固醇運(yùn)輸?shù)饺砀魈幖?xì)胞，運(yùn)輸?shù)礁闻K合成膽酸，其可用于研究受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用過程，尤其是在動(dòng)脈粥樣硬化等疾病中，其血漿來源的LDL可用于研究LDL在功能和代謝中的氧化作用。

氧化的LDL（Ox-LDL）是修飾LDL中的一類。修飾的LDL除包括氧化修飾的LDL外，還包括乙酰化LDL及丙二醛（MDA）、4-羥烯酸（4-HNE）直接結(jié)合的LDL，這些未經(jīng)氧化修飾而僅經(jīng)一般化學(xué)修飾的LDL稱為衍化的LDL。不同于衍化的LDL，Ox-LDL 的生理學(xué)*性表現(xiàn)在：1）在細(xì)胞生理功能影響上，Ox-LDL可誘發(fā)細(xì)胞毒性作用，影響花生四烯酸的代謝，抑制膽固醇酯化作用等，但衍化的LDL無上述效應(yīng)；2）Ox-LDL消耗LDL內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)，使LDL上的維生素E含量下降，而MDA-LDL無上述效應(yīng)；3）氧化修飾涉及脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，LDL中的PUFAs被氧化。MDA對(duì)LDL修飾，是直接和ApoB-100結(jié)合成希夫氏堿，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)輕微；4）氧化LDL在氧化程度低時(shí)，ApoB降解；在氧化程度高時(shí)，ApoB又可發(fā)生再聚合。MDA對(duì)LDL的修飾，ApoB無降解、聚合反應(yīng)發(fā)生；5）Ox-LDL 產(chǎn)生的熒光峰波長為430nm，而MDA -LDL的熒光峰波長為460nm。Ox-LDL不經(jīng)LDL受體代謝，由清道夫受體識(shí)別、結(jié)合、內(nèi)吞飲入細(xì)胞并喪失正常的膽固醇代謝途徑，引起細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積，泡沫樣變。

LDL氧化修飾的方式有很多種，常見的有：1）細(xì)胞介導(dǎo)的LDL氧化修飾，又稱為生物氧化修飾的LDL。如內(nèi)皮細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，單核細(xì)胞都具有此功能；2）過度金屬離子介導(dǎo)的LDL氧化修飾，如Ca2+，F(xiàn)e2+等；還有其他形式的氧化修飾，包括物理方法如紫外線，或過氧化物酶催化。

本品為紅色熒光標(biāo)記的氧化型人源低密度脂蛋白（Human DiI-Ox-LDL），是標(biāo)記熒光探針DiI（1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）的Ox-LDL，可以標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，可用來鑒定并分選這些細(xì)胞，以及用來研究不同細(xì)胞系對(duì)修飾化LDL的內(nèi)吞作用。我司提供的DiI-Ox-LDL，每個(gè)批次均經(jīng)過牛大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞和小鼠巨噬細(xì)胞的標(biāo)記檢測(cè)來評(píng)估產(chǎn)品的標(biāo)記特異性，從而保證結(jié)果的一致性。

YEASEN提供的Human DiI-Ox-LDL為無菌包裝，可以直接稀釋使用。除提供DiI-Ox-LDL，我們還提供不帶標(biāo)記的Ox-LDL，Ac-LDL（乙酰化修飾）以及不經(jīng)修飾的LDL等。

產(chǎn)品性質(zhì)
 

運(yùn)輸與保存方法
 

冰袋運(yùn)輸。

4ºC無菌避光，收到貨后可穩(wěn)定保存6周。千萬不可凍存！使用時(shí)一定要無菌操作！

注意事項(xiàng)

1)本品的稀釋工作液極不穩(wěn)定，建議即配即用；

2)長期貯存可能會(huì)有沉淀析出，屬于正?，F(xiàn)象，低速離心2 min去除沉淀即可使用；

3)LDL與LDL受體的結(jié)合需要Ca2+和Mn2+的參與，過量EDTA的存在會(huì)抑制其結(jié)合；

4)為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

操作步驟

1)無菌條件下，將Human DiI-Ox-LDL用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至20-40 µg/ml。

2)加入活細(xì)胞內(nèi)，37℃培養(yǎng)3-6小時(shí)。

3)孵育結(jié)束，吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培養(yǎng)基，并用無探針的培養(yǎng)基洗幾次。

4)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

a）熒光顯微鏡觀察

采用標(biāo)準(zhǔn)的羅丹明激發(fā)：發(fā)射濾光片（或建議使用波長為：Ex/Em=549nm/565nm）；若需要請(qǐng)使用含3%甲醛的PBS進(jìn)行固定，切勿使用甲醇或丙酮固定，因Dil易溶于有機(jī)溶劑。注：需設(shè)陽性細(xì)胞以做對(duì)照。

   b）細(xì)胞分選（流式細(xì)胞術(shù)）

胰蛋白酶處理細(xì)胞或者加入EDTA制成單細(xì)胞懸液，選用合適的已標(biāo)記純化細(xì)胞用作陰性和陽性對(duì)照，從而進(jìn)行流式分選設(shè)門（gate）。（建議使用波長為Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm）。

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 HB180823