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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年
10614ES84UCF.ME™ mRNA加冒酶(GMP級(jí))
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 10614ES84 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：592更新時(shí)間：2022-03-21 16:54:46
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 2000 U |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 10614ES84 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | *（元） |
UCF.ME®mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade UCF.ME™ mRNA加冒酶(GMP級(jí)) | 10614ES84 | 2000U | 4625 | 4394 |
10614ES92 | 10000U | 17825 | 16934 | |
10614ES94 | 20000U | 29825 | / | |
10614ES96 | 100000U | 119325 | / |
產(chǎn)品描述
真核生物中mRNA經(jīng)轉(zhuǎn)錄后修飾在5'端形成一個(gè)特殊結(jié)構(gòu)，即帽子結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)對(duì)mRNA的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)與翻譯過(guò)程均有較重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子結(jié)構(gòu)的有效酶，其由D1和D12兩個(gè)亞基組成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鳥(niǎo)苷?；D(zhuǎn)移酶活性和鳥(niǎo)嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶活性，可將7-甲基鳥(niǎo)嘌呤帽結(jié)構(gòu)（m7Gppp）連接到RNA的5'末端（m7Gppp5'N）。牛痘病毒加帽酶，在合適濃度的加帽緩沖液（Capping buffer），鳥(niǎo)苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在條件下，能夠在一個(gè)小時(shí)之內(nèi)對(duì)RNA進(jìn)行加帽，并且保證正確的方向。
本品是按照GMP工藝要求生產(chǎn)，產(chǎn)品以無(wú)菌液體形式提供，可應(yīng)用于體內(nèi)/體外翻譯前mRNA的加帽反應(yīng)或mRNA的5'末端標(biāo)記反應(yīng)。
產(chǎn)品性質(zhì)
來(lái)源（Source） | 攜帶牛痘病毒加帽酶基因的E. coli |
最適溫度（Optimum Temperature） | 37℃ |
宿主核酸殘留（Host nucleic acid residue） | <10fg/U |
宿主蛋白殘留（Host protein residue） | <50ppm |
病原體（HBV/ HCV/HIV）檢測(cè) | 無(wú)檢出 |
內(nèi)毒素殘留（Endotoxin residue） | <0.05EU/1000U |
支原體檢測(cè)（Mycoplasma detection） | 無(wú)檢出 |
無(wú)菌檢測(cè)（Sterility testing） | 無(wú)檢出 |
儲(chǔ)存緩沖液（Storage Buffer） | 20 mM Tris-HCl pH 8.0，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100，50%甘油 |
活性單位定義（Unit Definition） | 37℃條件下，1小時(shí)內(nèi)將10 pmol GTP（α- 32P）摻入到一條含80個(gè)核苷酸（80 nt）轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上所需要的酶量，即為1個(gè)單位。 |
【注】：具體產(chǎn)品質(zhì)檢數(shù)據(jù)及更多指標(biāo)請(qǐng)查看批次質(zhì)檢報(bào)告
產(chǎn)品組分
組分編號(hào) | 組分名稱 | 產(chǎn)品編碼/規(guī)格 | |||
10614ES84 （2000U） | 10614ES92 （10000U） | 10614ES94 （20000U） | 10614ES96 （100000U） | ||
10614 | Vaccinia Capping Enzyme（10U/μL） | 200μL | 1mL | 1mL×2 | 10mL |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年。
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作；
2）所提取的RNA需經(jīng)過(guò)純化并使用無(wú)核酸酶的水重懸；
3）在加入酶之前需要對(duì)RNA溶液進(jìn)行加熱以去除5'末端的二級(jí)結(jié)構(gòu)；
4）對(duì)于已知5'末端結(jié)構(gòu)的RNA，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間至60分鐘，提高加帽效率；
5）5'末端標(biāo)記反應(yīng)體系中，GTP儲(chǔ)液應(yīng)稀釋為反應(yīng)體系中mRNA摩爾濃度的1-3倍。
使用方法
1. 加帽反應(yīng)（反應(yīng)體系20 μL）
本步驟適用于10 μg RNA（≥ 100 nt）的加帽反應(yīng)，且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大。
1）取10 μg RNA至1.5 mL離心管，使用無(wú)核酸酶的水稀釋至15 μL；
2）65℃加熱5分鐘；
3）取出離心管置于冰上5分鐘；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 15μL |
10×Capping Buffer | 2.0μL |
GTP（10 mM） | 1.0μL |
SAM（2 mM） | 1.0μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10U/μL） | 1.0μL |
【注】：10×Capping Buffer配方為：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0，50 mM KCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT。
5）37°C孵育30分鐘；
6）RNA加帽完成，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2. 5'末端標(biāo)記反應(yīng)（反應(yīng)體系20μL）
本步驟適用于5'末端帶有三磷酸的RNA標(biāo)記，且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大，其標(biāo)記效率受反應(yīng)體系中RNA與GTP摩爾濃度比以及RNA樣本中GTP含量影響。
1）取適量RNA到1.5 mL離心管，使用無(wú)核酸酶的水稀釋至14 μL；
2）65℃加熱5分鐘；
3）取出離心管置于冰上5分鐘；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 14.0μL |
10×Capping Buffer | 2.0μL |
GTP mix | 2.0μL |
SAM（2mM） | 1.0μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10U/μL） | 1.0μL |
【注】：GTP mix為GTP和少量標(biāo)記物，其中GTP使用濃度參照注意事項(xiàng)5）。
5）37°C孵育30分鐘；
6）RNA 5'末端標(biāo)記完成，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
HB220224
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