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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·12年
36417ES03rProtein A/G MagBeads （IP Grade）
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 36417ES03 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：509更新時(shí)間：2023-07-12 10:41:57
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1ml |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 36417ES03 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品性質(zhì)
基質(zhì)（Matrix spherical） | 聚合物磁性微球 |
配體（Ligand） | 重組Protein A/G |
結(jié)合能力（Binding Capacity） | ＞50µg hIgG /mg |
粒徑 （Particle size） | 1μm |
磁珠濃度（Concentration） | 10mg/mL |
儲(chǔ)存緩沖液（Storage Buffer） | PBS，0.01% Tween-20, 0.02% NaN3 |
應(yīng)用（Application） | rProtein Purification, Immunoprecipitation |
運(yùn)輸和保存方法
低溫運(yùn)輸。2-8℃長期儲(chǔ)存，有效期2年。
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
工作液濃度應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)確定，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳實(shí)驗(yàn)濃度。
1. 緩沖液配制
平衡/結(jié)合/ 洗雜液: | 0.15M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0 |
交聯(lián)液： | 0.2 M 三乙醇胺, pH 8.2 |
中和緩沖液： | 1M Tris-HCl，pH 8.5 |
洗脫緩沖液： 終止液： | 0.1M 甘，pH 3.0 50 mM Tris, pH 7.5 |
2. 抗原樣品制備
本操作說明書提供以下四種樣品處理方法，建議您根據(jù)不同來源的抗原樣品選擇適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行預(yù)處理，使待檢測(cè)抗原釋放至樣品溶液中。
血清樣品處理：若目標(biāo)蛋白豐度較高， 建議用結(jié)合緩沖液稀釋血清樣品至目標(biāo)蛋白終濃度為10-100µg/mL，置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。
懸浮細(xì)胞樣品處理：離心收集細(xì)胞（4℃, 500g, 10min），棄上清后稱重，按每毫克細(xì)胞50µL的比例用1×PBS洗滌2次；按每毫克細(xì)胞5-10µL的比例加入結(jié)合緩沖液，同時(shí)加入蛋白酶抑制劑，混勻后置于冰上處理10min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
貼壁細(xì)胞樣品處理：移去培養(yǎng)基，按每 1.0×105個(gè)細(xì)胞150µL的比例用1×PBS洗滌兩次；用細(xì)胞刮棒刮脫細(xì)胞，收集至1.5mL EP管內(nèi)，按每 1.0×105個(gè)細(xì)胞20-30µL的比例加入結(jié)合緩沖液，同時(shí)加入蛋白酶抑制劑，混勻后置于冰上處理10min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
大腸桿菌樣品處理： 離心收集大腸桿菌（4℃, 12000g, 2min）， 棄上清后稱重， 按每克（濕重）菌體10mL的比例用1×PBS洗滌2次；按每克（濕重）菌體5-10mL的比例加入結(jié)合緩沖液，同時(shí)加入蛋白酶抑制劑，重懸菌體，超聲裂解細(xì)胞，離心收集上清（4℃, 17000g, 10min）。
3. 磁珠預(yù)處理：將磁珠漩渦振蕩1min，使其充分混懸；取25-50µL（相當(dāng)于50-100µg）磁珠懸液置于1.5mL EP管中。加入200µL結(jié)合緩沖液洗滌，進(jìn)行磁性分離，吸棄上清，重復(fù)1次。加入200 µL結(jié)合緩沖液重懸磁珠備用。
4. 抗體吸附
1) 加入 100 μL平衡液將磁珠懸浮，加入目標(biāo)抗體溶液，充分混勻。
2) 室溫孵育 10min，可以振蕩或漩渦混合均勻。
3) 將EP 管置于磁分離器上，待磁珠全部吸附后，吸棄上清液。如需要可留做進(jìn)一步檢測(cè)。
4) 加入500μL 洗雜液混合均勻，置于磁分離器上，待磁珠全部吸附后，吸棄上清液。重復(fù) 洗雜至少 3次。
5. 抗體交聯(lián) (備選)
1） 如果需要將抗體和目標(biāo)抗原復(fù)合物共同洗脫，請(qǐng)忽略本步驟，直接進(jìn)行操作6。 50μL-1mL 磁珠量均可以按照以下步驟操作，無需額外增加交聯(lián)液體積。
2）加入 1mL交聯(lián)液，振蕩懸浮，置于磁分離器上，大約1min，待溶液變澄清后，吸棄上清液。該操作重復(fù)兩次。
3）再加入1mL含有20 mM DMP（dimetylpimelimidate dihydrochloride）的交聯(lián)液， 此試劑需要現(xiàn)用現(xiàn)配。振蕩懸浮，在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管， 促使溶液和磁珠充分接觸，約30min后，置于磁分離器上，大約 1min，待溶液變澄清 后，吸棄上清液。
4）使用1mL終止液懸浮磁珠，終止交聯(lián)反應(yīng)，在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管，促使溶液和磁珠充分接觸，約15min后，置于磁分離器上，大約 1min，待溶液變澄清后，吸棄上清液。
5）加入1mL平衡液，顛倒混勻，置于磁分離器上，大約 1min，待溶液變澄清后，吸棄上清液。再重復(fù)兩次。
6. 抗原結(jié)合反應(yīng)
1) 加入含有抗原的樣品（通常100-1000μL)，用移液器輕輕吹打使抗原與磁珠-抗體復(fù)合物均勻分散。
2) 在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管 10min，使抗原與抗體充分結(jié)合，如結(jié)合力較弱則可在室溫下反應(yīng)1h或者在4℃下反應(yīng)過夜。
3) 上述完成抗原吸附的磁珠-抗體-抗原復(fù)合物進(jìn)行磁性分離，收集上清液，以備后續(xù)檢測(cè)。
4) 向離心管中加入1mL洗雜液，用移液器輕輕吹打使磁珠-抗體-抗原復(fù)合物均勻分散，然后進(jìn)行磁性分離，棄上清液；從磁分離器上取下離心管，再重復(fù)洗滌兩次。
7．抗原洗脫
A. 變性洗脫 此方法洗脫的樣品適用于SDS-PAGE檢測(cè)。
1) 從磁分離器上取下離心管，向其中加入25μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均勻， 95℃加熱 5min。
2) 置于磁性分離器上，進(jìn)行磁性分離，收集上清液進(jìn)行SDS-PAGE檢測(cè)。
B. 非變性洗脫
1) 向磁珠-抗體-抗原復(fù)合物中加入50 μL 洗脫液，混合均勻，室溫孵育5min。
2) 置于磁性分離器上，進(jìn)行磁性分離，收集洗脫液至新的 EP 管中。
3) 重復(fù)步驟 1）和2），收集洗脫液，與2）中洗脫液混合，加入中和液中和至 pH7.0-8.0。
HB210916
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