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INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑
參考價: 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 產(chǎn)品型號
  • Polyplus 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問次數(shù)：3827更新時間：2023-03-15 09:02:09

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產(chǎn)品簡介
供貨周期 一周 應用領域 生物產(chǎn)業(yè)
INTERFERin®是Polyplus公司提供的一款非脂質(zhì)體PEI陽離子、兩性分子轉(zhuǎn)染試劑，專門為將siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染到哺乳動物細胞中而開發(fā)。這種轉(zhuǎn)染試劑包裹siRNA或miRNA形成陽離子復合物，該復合物與細胞表面帶負電的蛋白聚糖相互作用吸附在細胞表面，通過內(nèi)吞進入細胞，形成內(nèi)含體。
產(chǎn)品介紹

INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent

INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

價格（元）

INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent

INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑

409-01

0.1 mL

655.00

409-10

1 mL

3135.00

產(chǎn)品描述 

INTERFERin®是Polyplus公司提供的一款非脂質(zhì)體PEI陽離子、兩性分子轉(zhuǎn)染試劑，專門為將siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染到哺乳動物細胞中而開發(fā)。這種轉(zhuǎn)染試劑包裹siRNA或miRNA形成陽離子復合物，該復合物與細胞表面帶負電的蛋白聚糖相互作用吸附在細胞表面，通過內(nèi)吞進入細胞，形成內(nèi)含體。該轉(zhuǎn)染試劑具有質(zhì)子海綿的作用，能夠吸收溶酶體中的H+，質(zhì)子的不斷流入，導致復合體腫脹破裂，從而使外源siRNA或miRNA釋放到細胞質(zhì)中。

INTERFERin®可在廣泛的細胞系中，實現(xiàn)1 nM的siRNA超過90%的表達效率，避免了脫靶效應。適用于多種細胞轉(zhuǎn)染，包括Hela、MCF-7、NIH-3T3等貼壁細胞；對于難以轉(zhuǎn)染的懸浮細胞系，如K562或THP-1細胞，siRNA終濃度為5nM時，可達到80%的沉默效率；同時還可以轉(zhuǎn)染原代人成纖維細胞和原代人肝細胞等，可達到80%的沉默效率。除此之外，也可根據(jù)轉(zhuǎn)染的細胞系、核酸種類、轉(zhuǎn)染時間等，登錄Polyplus公司的網(wǎng)///址，搜索該產(chǎn)品引文數(shù)據(jù)庫。Polyplus數(shù)據(jù)庫提供了400多種的轉(zhuǎn)染條件數(shù)據(jù)可供參考，Polyplus：w/w/w.polyplus transfection.c/o/m.

運輸與保存方法

冰袋（wet ice）運輸。產(chǎn)品4 ºC保存，一年有效。不可冷凍！

注意事項

1）整個實驗過程使用無RNA酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。

2）轉(zhuǎn)染前，確保siRNA/miRNA是經(jīng)過PAGE純化和脫鹽處理過的，高純度的siRNA或者miRNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。

3）INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑應該在4 ºC保存，要注意避免多次反復長時間開蓋，否則可能會導致轉(zhuǎn)染試劑揮發(fā)，降低轉(zhuǎn)染效率。

4）轉(zhuǎn)染前一天，確保接種貼壁細胞密度在30%-50%，對于一些小細胞和生長緩慢的細胞，接種密度可適當擴大2倍。

5）轉(zhuǎn)染前，確保siRNA/miRNA基因沉默表達不會影響細胞活力。

6）該產(chǎn)品只適合體外轉(zhuǎn)染，不能用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染。

操作流程

一．貼壁細胞轉(zhuǎn)染（以24孔板和轉(zhuǎn)染1 nM siRNA為例，其他培養(yǎng)板加樣體積請參考表1）

為了提高轉(zhuǎn)染效率，建議在轉(zhuǎn)染前一天接種細胞，接種細胞密度建議30%-50%，建議初次使用時設置梯度進行優(yōu)化//佳使用量。

 

 

【注】：由于靶基因、細胞類型、siRNA效價、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周轉(zhuǎn)率等因素，均會影響siRNA的轉(zhuǎn)染效率。建議選取siRNA濃度在1 nM到10 nM之間。轉(zhuǎn)染試劑的體積應根據(jù)siRNA濃度和培養(yǎng)皿的大小進行調(diào)整，請參見下表1。

表1 siRNA終濃度為1 nM時，轉(zhuǎn)染試劑、培養(yǎng)基的用量參考值

培養(yǎng)皿

siRNA物質(zhì)的量(pmoles)

每孔siRNA的含量（ng）

INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑體積（µL）

siRNA-INTERFERin®復合物的體積V1（µL）

*培養(yǎng)基的體積V2

終體積（V=V1+V2）

96孔板

0.17

2.4

0.75 ± 0.5 

50

125 µL

175 µL

24孔板

0.6

8.4

2 ± 1

100

500 µL

600 µL

12孔板

1.2

17

4 ± 2

200

1 mL

1.2 mL

6孔板

2.2

31

8 ± 4

200

2 mL

2.2 mL

25 cm2培養(yǎng)瓶 

4.4

62

15 ± 5

400

4 mL

4.4 mL

75 cm2培養(yǎng)瓶 

10.5

147

40 ± 10

500

10 mL

10.5 mL

表2 siRNA終濃度為10~50 nM時，轉(zhuǎn)染試劑、培養(yǎng)基的用量參考值

培養(yǎng)皿

INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑體積（µL）

siRNA-INTERFERin®復合物的體積V1（µL）

*培養(yǎng)基的體積V2

終體積V（V=V1+V2）

96孔板

1 ± 0.5

50

125 µL

175 µL

24孔板

3 ± 1

100

500 µL

600 µL

12孔板

6 ± 2

200

1 mL

1.2 mL

6孔板

12 ± 4

200

2 mL

2.2 mL

25cm2培養(yǎng)瓶 

20 ± 5

400

4 mL

4.4 mL

二．懸浮細胞轉(zhuǎn)染（以24孔板和轉(zhuǎn)染5 nM siRNA為例，其他培養(yǎng)板加樣體積請參考表4）
接種細胞

1.為了優(yōu)化懸浮細胞轉(zhuǎn)染條件，與貼壁細胞相比，需要降低懸浮細胞的培養(yǎng)基的體積。根據(jù)培養(yǎng)皿大小和完整培養(yǎng)基的體積，推薦的接種懸浮細胞的數(shù)量如下表3所示。

 

表3 轉(zhuǎn)染當天，根據(jù)培養(yǎng)皿的大小，接種懸浮細胞數(shù)量參考值

培養(yǎng)皿

每孔接種細胞懸浮液體積（μL）

轉(zhuǎn)染當天接種細胞數(shù)

384孔板

25

5 ×103~1×104

96孔板

50

1×104~ ×104

24孔板

200

1×105 ~ 2×105

12孔板

500

2×105 ~ 4×105

6孔板

1000

5×105 ~ 2×106

25 cm2培養(yǎng)瓶 

2000

2×106~ 5×106

2.按照以下體系配制siRNA-INTERFERin®復合物： 

1）對于每孔細胞，使用100 μL無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋21 ng siRNA (1.5 pmols)，混勻。

2）向100 μL的siRNA中加入4 μL的轉(zhuǎn)染試劑，立刻旋渦10秒，充分混勻。

3）在室溫孵育15 min，使得形成siRNA-INTERFERin®復合物。
【注】：孵育時間不要超過30 min

4）在每孔200 μL細胞懸浮液中，加入100 μL的siRNA-INTERFERin®復合物，輕輕混勻。終體積為300 µL，siRNA終濃度為5 nM。

5）37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-6 h后，再加入700 µL*培養(yǎng)基，輕輕搖動培養(yǎng)板使其混勻。

6）繼續(xù)放入培養(yǎng)箱中孵育，直至目的基因表達。建議一般mRNA表達水平通常在24-72 h，蛋白表達水平在48-96 h。

【注】：為了優(yōu)化內(nèi)源性基因沉默，建議選取siRNA濃度在5 nM到20 nM之間。轉(zhuǎn)染試劑的體積應根據(jù)siRNA濃度和培養(yǎng)皿的大小進行調(diào)整，請參見下表4。

表4 siRNA濃度為5 nM時，在懸浮細胞中的參考值

培養(yǎng)皿

懸浮細胞的體積

siRNA的濃度(pmoles)

每孔siRNA的含量（ng）

轉(zhuǎn)染試劑體積（µL）

siRNA-INTERFERin®復合物的體積（µL）

轉(zhuǎn)染4-6h后另加入培養(yǎng)基的體積

384孔板

25 µL

0.25

3.75

1 ± 0.5  

25

0 µL

96孔板

50 µL

0.5

7.5

2 ± 1

50

100 µL

24孔板

200 µL

1.5

21

3 ± 2  

100

700 µL

12孔板

500 µL

3.5

49

6 ± 4

200

1 mL

6孔板

1 mL

6

84

10 ± 8

200

2 mL

25cm2培養(yǎng)瓶 

2 mL

12

168

15 ±10

400

4 mL

表5 懸浮細胞中siRNA濃度、轉(zhuǎn)染試劑的用量參考值

siRNA的終濃度/孔

培養(yǎng)皿

INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑的體積/孔

1 ~ 20 nM

 

386孔板

1 ± 0.5 µL

96孔板

2 ± 1 µL

24孔板

3 ± 2 µL

6孔板

10 ± 8 µL

20 ~ 50 nM

386孔板

1.5 ± 0.5 µL  

96孔板

3 ± 1 µL

24孔板

5 ± 2 µL

6孔板

15 ± 8 µL

三．miRNA轉(zhuǎn)染操作流程
該轉(zhuǎn)染試劑也適合轉(zhuǎn)染miRNA，轉(zhuǎn)染貼壁細胞和懸浮細胞的具體操作請參考siRNA的操作流程。

相關產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

價格（元）

jetPRIME®in vitro DNA & siRNA transfection reagent

114-01

0.1 mL

835.00

114-15

1.5 mL

6395.00

jetOPTIMUS® in vitro DNA transfection reagent

117-01

0.1 mL

835.00

117-15

1.5 mL

6855.00

jetPEI®DNA transfection, HTS application

101-10N

1 mL

4565.00

INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent

409-01

0.1 mL

655.00

409-10

1 mL

3135.00



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