產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

螢火蟲(chóng)螢光素酶（Firefly luciferase）是一種分子量約為61kDa的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，能夠催化螢光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過(guò)程中會(huì)發(fā)出波長(zhǎng)為560 nm左右的生物螢光，該螢光可通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)原理如圖所示：

圖1：螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)原理圖

Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay kit是一種輝光型螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒，具有高靈敏度和發(fā)光信號(hào)穩(wěn)定的特點(diǎn)，可以滿(mǎn)足高通量檢測(cè)螢光素酶在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)。

相對(duì)于閃光型Firefly Luciferase Reporter Gene Aassy Kit（Cat#.11401），本品具有以下優(yōu)點(diǎn)：1）發(fā)光信號(hào)更穩(wěn)定性，為實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供了更大的靈活性。2）采用加樣-混勻-檢測(cè)的操作方法，無(wú)需依賴(lài)自動(dòng)進(jìn)樣器，并且無(wú)需棄培養(yǎng)液、離心等步驟，大大的簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程。3）無(wú)明顯刺激性氣味。

本試劑盒可用于多種常用細(xì)胞培養(yǎng)液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均為2h左右（22℃），滿(mǎn)足絕大多數(shù)高通量實(shí)驗(yàn)需求。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存方式

干冰運(yùn)輸。未拆封試劑盒-20℃保存，有效期1年。

溶解分裝后的輝光型螢火蟲(chóng)螢光素酶底物于-70℃避光保存1年，或-20℃短期保存不超過(guò)1個(gè)月。

使用說(shuō)明

1.需自備的材料

單/多道移液器、不透光細(xì)胞培養(yǎng)白板、化學(xué)發(fā)光儀或帶化學(xué)發(fā)光檢測(cè)模塊的酶標(biāo)儀。

2.檢測(cè)試劑準(zhǔn)備

使用時(shí)將輝光型螢火蟲(chóng)螢光素酶緩沖液一次性全部倒入輝光型螢火蟲(chóng)螢光素酶底物瓶中，充分混勻后按使用需求分裝，建議-70℃長(zhǎng)期保存或-20℃保存不超過(guò)一個(gè)月。分裝凍存后的檢測(cè)試劑，后續(xù)每次實(shí)驗(yàn)前需平衡至室溫。

注：輝光型螢火蟲(chóng)螢光素酶緩沖液可以室溫或水浴融化，但溫度不能超過(guò)25℃。

3.操作步驟

1）從細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出含哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)板，放置5-15 min，平衡至室溫。

2）加檢測(cè)試劑：加入與待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液等體積并平衡至室溫的檢測(cè)試劑（例如，96孔板通常加入100 μl培養(yǎng)液，相應(yīng)加入100 μl檢測(cè)試劑；384孔板通常加入30 μl培養(yǎng)液，相應(yīng)加入30 μl檢測(cè)試劑）。

3）振蕩混勻：為了使得細(xì)胞裂解充分，建議在水平搖床上室溫混勻5-10 min（注：不要用移液器吹吸混勻，產(chǎn)生的氣泡會(huì)影響發(fā)光檢測(cè)讀數(shù)?；靹驎r(shí)間可根據(jù)細(xì)胞量進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，以確保細(xì)胞充分裂解，得到穩(wěn)定的發(fā)光檢測(cè)結(jié)果）。

4）檢測(cè)：在化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀或帶化學(xué)發(fā)光模塊的多功能酶標(biāo)儀上檢測(cè)發(fā)光信號(hào)，加入檢測(cè)試劑后2 h內(nèi)完成檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

1）反應(yīng)溫度：酶促反應(yīng)對(duì)溫度較為敏感，加樣檢測(cè)前務(wù)必將檢測(cè)試劑以及細(xì)胞培養(yǎng)液平衡至室溫（20-25℃）。

2）檢測(cè)儀器：能檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同，測(cè)得的光信號(hào)值也會(huì)不同。

3）檢測(cè)板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光細(xì)胞培養(yǎng)白板。

4）檢測(cè)設(shè)置：Luminescence，350-700 nm，建議讀板時(shí)間設(shè)為0.5-1 sec。

5）發(fā)光信號(hào)會(huì)受到檢測(cè)環(huán)境如培養(yǎng)基組分、溫度等影響，應(yīng)確保同組內(nèi)不同樣本檢測(cè)條件一致。

6）多個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)板檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)盡量確保每板加入檢測(cè)溶液后孵育時(shí)間一致，以獲得最佳的檢測(cè)結(jié)果。

7）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套。

相關(guān)產(chǎn)品

HB220325