產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

FastCut BglII快速限制性內(nèi)切酶是通過基因工程重組技術(shù)，可在5~15 min內(nèi)精確完成DNA切割的快速限制性內(nèi)切酶，適用于快速切割質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物、基因組DNA等。FastCut™系列快速內(nèi)切酶共用一種酶切緩沖液，從而簡化了酶切反應(yīng)體系，另外，有良好的酶活冗余度，可輕松處理底物過量或困難模板的酶切。

產(chǎn)品組分

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20°C保存，有效期2年。

識別位置

5'-A↓GATCT-3'

3'-TCTAG↑A-5'

推薦反應(yīng)條件

1× FastCut™ 緩沖液；

37°C孵育。

失活條件

80°C孵育20 min。

注意事項

1）3 h孵育未表現(xiàn)星號活性，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性；

2）受EcoBI甲基化影響，序列可能重疊，剪切受阻；

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作；

4）本產(chǎn)品僅作科研用途！

質(zhì)量控制

1. 功能活性檢測：最適反應(yīng)溫度下，在20 μL反應(yīng)體系中，1 μL酶能夠在15 min內(nèi)*消化1 μg λDNA。

2. 超長時間孵育檢測：最適反應(yīng)溫度下，將1 μL酶與1 μg λDNA共孵育3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，但延長孵育時間可能出現(xiàn)星號活性。

3. 酶切-連接-再酶切檢測：最適反應(yīng)溫度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切產(chǎn)物，在22°C下使用適量T4 DNA連接酶可以將酶切產(chǎn)物重新連接，將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

4. 非特異性內(nèi)切酶活性檢測：最適反應(yīng)溫度下，將1 μL酶與1 μg超螺旋質(zhì)粒DNA共同孵育4 h后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。

5. 藍白斑檢測：將含有單一lacZα基因的載體以1 μL酶消化，重新連接后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細胞，涂布在含有對應(yīng)抗生素、IPTG和X-gal的LB培養(yǎng)基平板上。連接正確的產(chǎn)物會生長出藍色菌落，而連接錯誤（即DNA末端切口不完整）的產(chǎn)物將得到白色菌落。對于FastCut™系列限制酶而言，白色菌落比例應(yīng)小于1%。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1）按如下建議的加樣順序配制體系反應(yīng)液（冰上操作）：

*本體系指已純化后的PCR產(chǎn)物。未純化的PCR產(chǎn)物具備一定的離子強度，10×FastCut TM Buffer加入量可適當(dāng)減少至2 μL。若下一步進行克隆等實驗，酶切前需純化PCR產(chǎn)物。

2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴。

3）37°C孵育15 min（質(zhì)粒），或15~30 min（PCR 產(chǎn)物），或30~60 min（基因組 DNA）。

4）80°C溫育 20 min 即可使酶失活，停止反應(yīng)（可選）。

2. 雙酶切或多酶切

1）每種內(nèi)切酶的用量為1 μL，并根據(jù)需要適當(dāng)擴大反應(yīng)體系。

2）所有內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10。

3）如果選用的幾種內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，以較高的溫度進行孵育。

3.質(zhì)粒的擴大反應(yīng)體系

【注】：如果總反應(yīng)體系大于20 μL，可使用水浴、金屬浴或沙浴，并增加孵育時間。

不同DNA中的識別位點數(shù)

甲基化修飾影響

不同反應(yīng)緩沖液中的活性

【注】：活性數(shù)據(jù)來自翌圣生物限制酶標準反應(yīng)體系下的檢測。

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HB220107