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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 100U |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10145ES60 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè) |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格（元) |
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase Hieff Canace® 耐U+高保真DNA聚合酶 | 10145ES60 | 100 U | 395.00 |
10145ES76 | 500 U | 1995.00 |
耐U+高保真DNA聚合酶描述
Hieff Canace Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase是一種基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代高保真DNA聚合酶，和Pfu DNA Polymerase相比，Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase的性能得到大幅度提升，針對復雜的模板也能快速準確的完成PCR反應。其保真性改善顯著，且*克服了常規(guī)高保真酶無法以dUTP為原料進行聚合反應、無法使用含有dUTP的擴增引物以及無法使用含有dUTP的DNA作為擴增模板等諸多弊病。本產品配備了優(yōu)化后的酶緩沖液，添加了PCR增強組分，使得該酶具有的擴增效率和廣泛的模板適應性，適合復雜模板的擴增。擴增產物為平末端。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產品編號/規(guī)格 | |
10145ES60（100 U） | 10145ES76（500 U） | ||
10145-A | Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA Polymerase（1 U/μL） | 100 μL | 500 μL |
10145-B | 2×Canace® Uracil+ PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 3×1 mL | 15×1 mL |
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20 °C保存，有效期一年。
產品應用
使用含dUTP的引物進行高保真文庫擴增
使用含dUTP的模板進行高保真文庫擴增
使用含dUTP的dNTP進行高保真文庫擴增
注意事項
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 本產品僅作科研用途！
使用方法
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase與常規(guī)高保真酶的使用方法略有不同。在使用前，請務必仔細閱讀使用說明。
1. 推薦反應體系
所有操作應于冰上進行，2×Canace® Uracil+ PCR buffer解凍后請充分混勻。體系配置之前請預熱PCR儀，各組分添加完成之后用移液器吸打充分混勻并短暫離心至管底，然后置于預熱的PCR儀中進行反應。所有組份使用完畢之后及時放回-20 °C保存。
表1 PCR擴增反應體系
組分 | 體積 (µL) |
模板DNA | X |
2×Canace® Uracil+ PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 25 |
正向引物 (10-25 μM） | 1-2.5 |
反向引物 (10-25 μM） | 1-2.5 |
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase（1 U/µL） | 1 |
ddH2O | Total to 50 |
【注】：
1) 模板：使用純化后的高質量DNA模板可以顯著提高擴增效率和成功率。
2) dNTPs：反應體系中dNTPs使用終濃度為200 μM。試劑盒中提供的dNTPs中不含dUTP，如特殊情況下需要制備含dUTP的模板，可自行額外添加dUTP至終濃度為400 μM。
3) 聚合酶濃度：在50 μL體系中，推薦使用1 U，可以在0.5-2 U之間進行優(yōu)化，請勿超過2 U。為了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建議將聚合酶在最后一步加到反應體系中。
4) Mg2+終濃度：反應體系中Mg2+終濃度為2 mM。如有特殊需要，可向我公司咨詢，要求提供低Mg2+濃度或不含Mg2+的buffer。
2．推薦反應程序
表2 PCR擴增反應程序
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
預變性 | 98 °C | 1 min | 1 |
變性 | 98 °C |
| 1-15（根據實驗要求） |
退火 | 60 °C | 30 sec | |
延伸 | 72 °C | 30 sec | |
終延伸 | 72 °C | 5 min | 1 |
Hold | 4 °C | - | - |
【注】：
1)預變性溫度推薦使用98 °C。預變性推薦時間：質粒DNA等簡單模板為30 sec；文庫為1 min；cDNA、基因組DNA等復雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。
2) 退火溫度推薦使用60 °C，也可根據需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間為20 sec，可以在10-30 sec內調節(jié)。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。
3) 延伸溫度和時間：推薦使用72 °C。延伸時間根據實際需要進行調整。
