產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

螢火蟲螢光素酶檢測組分（Firefly luciferase）是一種分子量約為61 kDa的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，能夠催化螢光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中會(huì)發(fā)出波長為560 nm左右的生物熒光，該螢光可通過化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行測定。

本試劑盒是一閃光型螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑，用于檢測裂解液裂解后釋放熒光素酶的產(chǎn)物，具有靈敏度高的特點(diǎn)，可以高靈敏的檢測螢光素酶在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)。建議搭配雙螢光素酶報(bào)告基因檢測裂解組分（Cat 11406）一起使用，效果更佳。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存方式

干冰運(yùn)輸。-20℃保存，有效期1年。

不能反復(fù)凍融，建議分裝-20℃或-80℃保存。

注意事項(xiàng)

1）檢測過程中需自備耗材和設(shè)備包括如下：PBS、100 μL移液器或者排槍、不透光白色酶標(biāo)板、Luminometer發(fā)光計(jì)、多功能酶標(biāo)儀或者其他能夠檢測生物發(fā)光的儀器；

2）反應(yīng)溫度：酶促反應(yīng)對溫度較為敏感，加樣檢測前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫（20-25℃）再使用；

3）檢測儀器：能檢測化學(xué)發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同，測得的光信號值也會(huì)不同；

4）檢測設(shè)置：Luminescence，350-700 nm，建議檢測時(shí)間設(shè)為2-10 sec；

5）檢測板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光白色酶標(biāo)板。黑色酶標(biāo)板也可用，但因黑色會(huì)吸收光信號，可能會(huì)降低信號；

6）單管熒光測定儀測定，每個(gè)樣品與測定試劑混合后到測定前的時(shí)間應(yīng)保持一致；

7）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

實(shí)驗(yàn)步驟

1）準(zhǔn)備裂解產(chǎn)物。

2）按照儀器說明書要求將熒光測定儀打開，設(shè)定參數(shù)，測定時(shí)間為10 sec，測定間隔為2 sec。

3）取20 μL裂解產(chǎn)物加入測量管中（保持每次樣品的加樣量一致），另外加入100 μL螢火蟲螢光素酶檢測試劑，震板混勻

2-3次，充分混勻后測定RLU（Relative light unit）。

4）分析數(shù)據(jù)。

①實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，在每個(gè)培養(yǎng)板中都應(yīng)設(shè)置對照組、實(shí)驗(yàn)組和空白對照組。為了保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，理論上每個(gè)實(shí)驗(yàn)組（包括對照組）都應(yīng)當(dāng)減去空白對照組的螢火蟲螢光素酶的發(fā)光測量值。

a.空白對照組：

背景F：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞+螢火蟲螢光素酶檢測試劑。

注：空白對照組的樣品量必須與實(shí)驗(yàn)樣品量相同，包含與實(shí)驗(yàn)樣品相同的培養(yǎng)基/血清組合，并加上*相同的檢測試劑。

b.實(shí)驗(yàn)組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)化合物處理(即實(shí)驗(yàn)組F)。

c.對照組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞不經(jīng)處理，用以標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果(即對照組F)。

②計(jì)算結(jié)果：

實(shí)驗(yàn)組=實(shí)驗(yàn)組F-背景F。

對照組=對照組F-背景F。

表達(dá)倍數(shù)=實(shí)驗(yàn)組/對照組。

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