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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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11185ESHieff UNICON® advanced qPCR SYBR Master Mix
| 參考價(jià) | ￥393 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 11185ES 型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
規(guī)格
| 1ml | 393元 | 999 件 可售 |
訪問(wèn)次數(shù)：411更新時(shí)間：2023-10-21 22:59:25
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,制藥 |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix是2×實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增的預(yù)溶液，具有熒光強(qiáng)度高，靈敏度高和特異性強(qiáng)，擴(kuò)增產(chǎn)量高等特點(diǎn)，顏色為藍(lán)色，具有加樣示蹤的作用。核心組分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗體法熱啟動(dòng)，可以有效抑制樣品準(zhǔn)備過(guò)程中引物退火導(dǎo)致的非特異性擴(kuò)增。同時(shí)配方添加了提升PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率因子和均衡不同GC含量（30~70%）基因擴(kuò)增的促進(jìn)因子，使定量PCR可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 11185ES03/11185ES08/11185ES50/11185ES60 |
規(guī)格 | 1 mL/5×1 mL/50×1 mL/100×1 mL |
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃避光保存，有效期18個(gè)月。
使用說(shuō)明
推薦qPCR反應(yīng)體系
組分 | 體積 （μL）*** | 體積 （μL）*** | 終濃度 |
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix | 25 | 10 | 1× |
Forward Primer (10 μM)* | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM)* | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
模板DNA/cDNA** | x | x | - |
無(wú)菌超純水 | Up to 50 | Up to 20 | - |
表1 qPCR反應(yīng)體系
*通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM之間進(jìn)行調(diào)整。
**如模板為未稀釋cDNA原液，使用體積不應(yīng)超過(guò)qPCR反應(yīng)總體積的1/10，最佳模板加入量以保證擴(kuò)增得到的Ct值在20-30個(gè)循環(huán)為宜。
***推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性；上機(jī)前需充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過(guò)多氣泡。
反應(yīng)程序
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 95℃ | 2 min | 1 |
變性 | 95℃ | 10 sec | 40 |
退火/延伸* | 60℃ | 30 sec** | |
熔解曲線階段* | 儀器默認(rèn)設(shè)置 | 1 | |
表2 qPCR反應(yīng)程序
*退火溫度和時(shí)間：請(qǐng)根據(jù)引物和目的基因的長(zhǎng)度進(jìn)行調(diào)整。
**熒光信號(hào)采集：請(qǐng)勿忘記打開熒光信號(hào)采集，按照儀器使用說(shuō)明書要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)程序設(shè)置，幾種常見儀器的時(shí)間設(shè)定如下：
20 sec：Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sec：Applied Biosystems 7300
32 sec：Applied Biosystems 7500
***熔解曲線：通常情況下可以使用儀器默認(rèn)程序。
適用機(jī)型
ABI：7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio1, 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;
Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0, Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR
引物設(shè)計(jì)指南
推薦引物長(zhǎng)度25 bp左右。擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度150 bp為佳，可以在100 bp-300 bp內(nèi)選擇。
正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過(guò)2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
引物堿基分布均勻，避免出現(xiàn)連續(xù)的4個(gè)相同堿基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一個(gè)堿基最好為G或C。
引物內(nèi)部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個(gè)堿基以上的互補(bǔ)序列。
引物特異性需要用NCBI BLAST程序進(jìn)行核對(duì)。避免引物 3’端有2個(gè)堿基以上的非特異性互補(bǔ)。
設(shè)計(jì)完成的引物需要進(jìn)行擴(kuò)增效率的檢測(cè)，只有具備相同擴(kuò)增效率的引物才可用于定量比較分析。
注意事項(xiàng)
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
解凍后Master Mix可能出現(xiàn)絮狀或白色沉淀，手握緩慢溶解并上下輕柔顛倒混勻至溶液澄清，不影響試劑性能。
推薦使用本公司cDNA合成試劑盒（貨號(hào)：11141ES），以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
若需要電泳，為了獲得清晰的條帶，建議將qPCR產(chǎn)物稀釋20-30倍后進(jìn)行電泳。
本產(chǎn)品僅作科研用途！
