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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè),制藥 |
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產品介紹
產品描述
Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）是一種聚合物磁性微球，由高質量的鼠源IgG單克隆抗體與carboxyl magnetic beads通過供價偶聯制備，本產品具有快速的磁響應性，超順磁性、良好的分散性、粒徑均一、極低的非特異結合和豐富的結合位點等特點，可用于帶有Flag標簽的蛋白免疫沉淀（IP）。
Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）可結合Met修飾的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag融合蛋白（Protein-FLAG）。
產品性質
配體 | Anti-Flag Antibody |
粒徑 | 200 nm |
結合能力 | >0.6 mg蛋白/mL 磁珠 |
磁珠濃度 | 10 mg/mL |
儲存緩沖液 | ddH2O |
運輸和保存方法
冰袋運輸。2-8℃儲存。避免凍存！有效期1年。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產品僅作科研用途！
使用方法
以免疫沉淀（IP）為例，步驟如下：
1樣品準備
樣品可以是細菌發(fā)酵液或者細胞裂解液， 樣品中不能含有顆粒不溶物，可以用0.22 μm濾膜過濾或10,000×g離心15 min。
2 磁珠預處理
2.1 用移液器輕柔吹打Anti-Flag免疫磁珠，使其充分混懸，取 25~50 µL 磁珠懸液置于1.5 mL離心管中。
2.2 加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer并輕輕移液器混合，用移液器輕柔吹打重懸Anti-Flag免疫磁珠，接著在磁力架上靜置1 min后，吸棄上清。
2.3 重復步驟 2.2 兩次。
3樣品的結合
3.1 在預處理后的磁珠中加入蛋白樣品，置于翻轉混合儀上孵育(常溫2 h，4 ℃過夜)；
3.2 將上述混合液置于磁力架上靜置1 min，然后把上清液轉移到新的離心管中備用(上清液可用于檢測Flag標簽蛋白是否存在殘留)，原離心管中剩余的即為 蛋白-磁珠復合物；
注意：結合過程中，磁珠可能會出現聚團或呈片狀，屬于正?，F象，不會影響實驗結果。
4洗滌
4.1 向步驟3.2所得的蛋白-磁珠復合物中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer ，用移液器輕柔吹打重懸，接著在磁力架上靜置 1 min 后, 吸棄上清；
4.2 重復步驟4.1兩次，直至洗滌后的上清液OD280小于0.05為止；
注意：如上清液的OD280仍大于0.05，則適當增加洗滌次數。
5蛋白洗脫
根據下游用途選擇洗脫方法。
5.1 Flag融合蛋白洗脫
1） 配制Flag多肽洗脫液：TBS中溶解Flag多肽，終濃度為0.2-1 mg/mL。
2） 分別加入100 μL Flag多肽洗脫液，4 ℃孵育 2 h-6 h（慢慢搖晃）
3） 分離磁珠上的磁珠并保存含有目標抗原的上清液。
4） 重復洗脫步驟一次以獲得更高的回收率
5.2 酸性洗脫（0.1 M Gly-HCl，pH 3.0）
1）加入100 μL 0.1 M Gly-HCl，pH 3.0，室溫孵育5-10 min（慢慢搖晃）。
2）分離磁珠上的磁珠并保存含有目標抗原的上清液。
3）中和低pH，每100 μL洗脫液加入20 μL中和緩沖液(1M Tris pH8.5)。最后的溶液可以用作樣品用于變性 SDS-PAGE。
5.3 用SDS-PAGE上樣緩沖液洗脫
如需直接檢測目的蛋白，則在上述洗滌過的蛋白-磁珠復合物中加入100 μL 1×SDS-PAGE上樣緩沖液，煮沸 5 min，冷卻至室溫并在磁力架上靜置 1 min 后，取上清進行 SDS-PAGE 檢測。
