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zeocin鹽酸博萊霉素 （細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）
zeocin鹽酸博萊霉素 （細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）

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更新時(shí)間：2024/9/1 21:01:14

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Zeocin可選擇Sh ble 基因表達(dá)的細(xì)胞。 與現(xiàn)在使用的其他動(dòng)物細(xì)胞標(biāo)記物無交叉抗性。因此這種抗生素可用來分離對(duì)其他篩選劑（如：慶大霉素，潮霉素）有抗性的克隆。Zeocin 是一種屬于爭(zhēng)光霉素家族的糖蛋白抗生素， 在體內(nèi)能作用于大多數(shù)細(xì)菌（包括E. coli ）、真菌（如：酵母菌）、植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞。


詳細(xì)介紹

 

Zeocin可選擇Sh ble 基因表達(dá)的細(xì)胞。與現(xiàn)在使用的其他動(dòng)物細(xì)胞標(biāo)記物無交叉抗性。因此這種抗生素可用來分離對(duì)其他篩選劑（如：慶大霉素，潮霉素）有抗性的克隆。Zeocin 是一種屬于爭(zhēng)光霉素家族的糖蛋白抗生素，在體內(nèi)能作用于大多數(shù)細(xì)菌（包括E. coli ）、真菌（如：酵母菌）、植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞。
使用:
● 液體Zeocin 可用于細(xì)胞培養(yǎng)。
● 用于篩選轉(zhuǎn)化株的Zeocin 濃度根據(jù)PH 值和鹽濃度改變。
● PH 越高，鹽濃度越低Zeocin 活性越大。
● 普通大腸桿菌菌株篩選可在25 µg/ml zeocin 濃度的低鹽LB 瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行，PH 調(diào)至7.5 。
● 動(dòng)物細(xì)胞篩選：根據(jù)不同細(xì)胞系從100 到 750 µg/ml 。
● 植物細(xì)胞篩選：根據(jù)不同的細(xì)胞種類和培養(yǎng)基從50 到 250 µg/ml 。
● 酵母篩選：取決于種屬和培養(yǎng)基，S. cerevisiae Sh ble 轉(zhuǎn)化株在50 µg/ml 濃度的YPD 培養(yǎng)基中篩選，PH7.0.
舉例：構(gòu)建融合Zeocin和GFP雙篩選標(biāo)記質(zhì)粒pcB-Zeo-GFP。方法質(zhì)粒LeCo-G／Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段，通過PCR反應(yīng)、BamHI酶切后連接替換空白質(zhì)粒pCB的篩選基因gpt，通過菌落PCR，酶切圖譜分析及測(cè)序分析鑒定重組質(zhì)粒，構(gòu)建成功后將其與野生型痘苗病毒進(jìn)行位點(diǎn)特異性同源重組，經(jīng)Zeocin藥物篩選2代后，用流式細(xì)胞儀觀察重組痘苗病毒GFP表達(dá)。結(jié)果經(jīng)菌落PCR，1號(hào)、5號(hào)和10號(hào)菌落中擴(kuò)增出426bp的目的條帶，與預(yù)期的大小**，經(jīng)酶切分析和DNA測(cè)序進(jìn)一步驗(yàn)證了重組質(zhì)粒pCB-zeo-GFP；該質(zhì)粒與野生型痘苗病毒同源重組，得到了重組的痘苗病毒；Zeocin篩選2代后，病毒上清感染細(xì)胞，流式細(xì)胞分析7．18％的細(xì)胞中有GFP的表達(dá)，而陰性對(duì)照僅有1．43％；Zeocin藥物篩選5代后，通過激光共聚焦可在80％以上的細(xì)胞中觀察帶GFP；提取的重組痘苗基因組DNA也擴(kuò)增出預(yù)期大小目的條帶。結(jié)論含Zeocin和GFP雙篩選標(biāo)記的新型重組痘苗病毒不僅具有可觀察性且具有藥物抗性，非常容易進(jìn)行篩選鑒定。
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