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當(dāng)前位置：> 供求商機(jī)> G418 sulfate （Geneticin）
所在地：Mpbio
貨物所在地：上海上海市
更新時(shí)間：2025/3/12 21:00:48
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產(chǎn)品說明：真核表達(dá)篩選用抗生素，可以用于篩選表達(dá)特定抗性基因的穩(wěn)定細(xì)胞株。篩選哺乳動(dòng)物細(xì)胞，推薦起始篩選濃度為400微克/毫升；篩選植物細(xì)胞，推薦起始篩選濃度為10微克/毫升；篩選酵母，推薦起始濃度為500微克/毫升。根據(jù)起始濃度的效果可以再適當(dāng)升高或降低G-418的使用濃度。
分子式：C20H 40N4O10·2H2SO4
分子量：692.71
CAS＃：108321-42-2
外觀：白色粉末
溶解性：可溶于水、甲醇、緩沖液和培養(yǎng)基。溶解后，0.22μm過濾除菌，分成小包裝，4℃可保存12個(gè)月，-20℃保存時(shí)間更長(zhǎng)。zui常用的儲(chǔ)存液使用100mM HEPES（pH7.3）配制，濃度為50mg/ml。使用HEPES配制的好處是：加入儲(chǔ)存液不會(huì)改變培養(yǎng)體系的pH值。
儲(chǔ)存條件：2-8℃
G418溶液的配制
配的時(shí)候就是用配好的HEPES溶G418，然后過濾，不用高壓滅菌了，配好后分裝，-20度保存，用的時(shí)候取一管放4度。
ddH2O 490ml
Nacl
Na2HPO4-12H2O
Kcl
Glu
HEPES
用氫氧化鈉調(diào)PH至7.3 ，定容至500ml
G418貯存液（50mg/ml）的配制
以下為細(xì)胞篩選的常用步驟：僅僅作為參考
1.G418的配制：取
2.細(xì)胞培養(yǎng)：取待測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液，按等量接種入多孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)6小時(shí)左右開始加藥。
3.制備篩選培養(yǎng)基：在100ug/ml~1000ug/ml范圍內(nèi)確定幾個(gè)梯度，比如先做個(gè)100ug/ml、400ug/ml、800ug/ml、1000ug/ml，按梯度濃度用培養(yǎng)基稀釋G418制成篩選培養(yǎng)基。
4.加G418篩選：吸除培養(yǎng)孔中培養(yǎng)基，PBS洗滌一次，每孔中加入不同濃度的篩選培養(yǎng)基。
5.換液：根據(jù)培養(yǎng)基的顏色和細(xì)胞生長(zhǎng)情況，每3~5天更換一次篩選培養(yǎng)基。方法同4.
6.確定*篩選濃度：在篩選10~14天內(nèi)能夠殺死所有細(xì)胞的zui小G418濃度即為*篩選濃度。在*輪就篩選出*G418濃度的可能性不大，zui有可能的是出現(xiàn)這種情況：用某一濃度G418的量在篩選14天后還不能殺死細(xì)胞，而用下一個(gè)梯度的 G418的量在10天前就看不到活細(xì)胞了。假如是400ug/ml不能殺死細(xì)胞，而800ug/ml在第5天就把所有細(xì)胞都?xì)⑺懒?，則可以再用500ug /ml、600ug/ml、700ug/ml進(jìn)一步篩選，以確定*篩選濃度！心得：由于特性明確的細(xì)胞系G418的*用量還是比較穩(wěn)定的，所以有時(shí)候不需要在這么大范圍內(nèi)進(jìn)行篩選。比如說你要轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞，現(xiàn)在我告訴你我測(cè)試過NIH3T3細(xì)胞對(duì)G418的敏感性，我用的篩選濃度是200 ug/ml，這時(shí)你就可以做150ug/ml、200ug/ml、 300ug/ml三個(gè)濃度進(jìn)行篩選。
通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定了*篩選濃度后，就可以做穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了。
a 轉(zhuǎn)染：轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)24小時(shí)或者更長(zhǎng)，到細(xì)胞增長(zhǎng)接近匯合時(shí)按1:4密度傳代，繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞密度增至50%~70%匯合時(shí)；
b 加G418：去掉培養(yǎng)液，PBS洗一次，加入按*篩選濃度配制好的G418篩選培養(yǎng)基。
c 換液：根據(jù)培養(yǎng)基的顏色和細(xì)胞生長(zhǎng)情況，每3~5天更換一次篩選培養(yǎng)基。當(dāng)有大量細(xì)胞死亡時(shí)，可以把G418濃度減半維持篩選。 篩選10~14天后，可見有抗性的克隆出現(xiàn)，停藥培養(yǎng)，待其逐漸增大后；
d 挑單克隆：制備細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)，用培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞到1個(gè)/10ul。在96孔板中加入培養(yǎng)基150ul/孔，再加入細(xì)胞懸液10ul/孔。待其逐漸增大后轉(zhuǎn)入到48孔中增殖。
e 單克隆鑒定：細(xì)胞大量擴(kuò)增后，提取總RNA,做RT-PCR檢測(cè)目的基因是否存在。
產(chǎn)品報(bào)價(jià)：
| 貨號(hào) | 名稱 | 產(chǎn)地 | 規(guī)格 | 報(bào)價(jià)（元） | *（元） | 庫(kù)存 |
| | G418 | Mpbio | | 2298 | 345 | 是 |
| | G418 | Mpbio | | 5895 | 1450 | 是 |
| 99261ES03 | G418 | YEASEN | | 320 |
| 是 |
| 99261ES05 | G418 | YEASEN | | 1250 |
| 是 |
翌圣生物科技（上海）股份有限公司 - 主營(yíng)產(chǎn)品： 抗體,小分子抑制劑,熒光染料,干細(xì)胞培養(yǎng),血清
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