如何用ELISA試劑盒,來(lái)測(cè)試大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β，RAT TGF-β ELISA KIT

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雌激素對(duì)去勢(shì)大鼠骨折愈合早期TGF-β表達(dá)的影響
 

初步探討戊酸雌二醇在骨質(zhì)疏松性骨折愈合過(guò)程中的作用，并通過(guò)其對(duì)TGF-β的影響進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松性骨折的治療提供理論依據(jù)。 方法：選用6月齡雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠54只，實(shí)驗(yàn)分為SHAM組(假手術(shù)組)、OVX組(去勢(shì)組)、補(bǔ)佳樂(lè)組。除SHAM組外，其余各組均切除雙側(cè)卵巢建立骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型。去勢(shì)后8周各組行右股骨骨折建立骨折模型，同時(shí)補(bǔ)佳樂(lè)組按0.104(mg/kg/d)灌胃。三組均在骨折后第2、4、6、8周處死大鼠后行放射學(xué)觀察骨痂變化，骨痂HE染色及成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)，并采用免疫組織化學(xué)的方法，觀察各階段骨痂TGF-β的表達(dá)變化及半定量分析。 結(jié)果：1.放射學(xué)：OVX組骨痂密度影低，8周時(shí)OVX組骨折線仍然存在，SHAM組和補(bǔ)佳樂(lè)組骨折線模糊甚至消失。2、骨痂組織學(xué)：OVX組骨小梁表面破骨細(xì)胞明顯增多，成骨細(xì)胞也較多，呈骨高轉(zhuǎn)換狀態(tài)。8周時(shí)骨小梁變細(xì)、中斷，軟骨成分仍較多，軟骨性骨痂向骨性骨痂轉(zhuǎn)化緩慢；SHAM組和補(bǔ)佳樂(lè)組隨骨折愈合骨小梁逐漸增加成熟，小梁骨粗大，排列緊密，骨小梁表面成骨細(xì)胞體積大，胞漿豐富，破骨細(xì)胞減少。3.成骨、破骨細(xì)胞指數(shù)：2，4周OVX組破骨細(xì)胞指數(shù)大于補(bǔ)佳樂(lè)組和SHAM組。成骨細(xì)胞指數(shù)在三組間無(wú)顯著性差異。4.TGF-β的免疫組化：OVX組2周時(shí)陽(yáng)性細(xì)胞主要是纖維組織內(nèi)的成纖維樣間充質(zhì)細(xì)胞和軟骨細(xì)胞，4周時(shí)軟骨細(xì)胞及周圍基質(zhì)陽(yáng)性著色。8周時(shí)成骨細(xì)胞及周圍類骨質(zhì)弱陽(yáng)性著色，肥大的軟骨細(xì)胞陽(yáng)性內(nèi)表達(dá)少或無(wú)。補(bǔ)佳樂(lè)組2周時(shí)軟骨細(xì)胞出現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性染色，4周時(shí)成骨細(xì)胞內(nèi)陽(yáng)性染色增強(qiáng)，周圍基質(zhì)也可見(jiàn)陽(yáng)性染色，軟骨細(xì)胞內(nèi)很少或無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。8周時(shí)軟骨細(xì)胞內(nèi)染色陰性，陽(yáng)性表達(dá)主要位于周圍類骨質(zhì)。SHAM組與補(bǔ)佳樂(lè)組類似。5.TGF-β半定量分析：各組在2周時(shí)蛋白陽(yáng)性表達(dá)積分光密度值達(dá)到峰值，以后逐漸下降，4周后下降明顯。不同時(shí)間點(diǎn)OVX組積分光密度值均明顯低于SHAM組和補(bǔ)佳樂(lè)組。 結(jié)論⒈本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示補(bǔ)佳樂(lè)(戊酸雌二醇)減少破骨細(xì)胞數(shù)目，增加了成骨細(xì)胞活性，抑制骨吸收、促進(jìn)骨形成，抑制了去勢(shì)后骨的高轉(zhuǎn)換狀態(tài)，促進(jìn)軟骨性骨痂向骨性骨痂轉(zhuǎn)化，提示戊酸雌二醇對(duì)于促進(jìn)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松性骨折早期愈合是有效的。 ⒉TGF-β在補(bǔ)佳樂(lè)組和SHAM組的表達(dá)均明顯高于OVX組，且主要表達(dá)于處于功能活躍期的軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞及其周圍基質(zhì)。提示TGF-β促進(jìn)軟骨和骨形成，抑制骨吸收，是骨折愈合中重要的細(xì)胞因子之一，雌激素可促進(jìn)TGF-β的分泌，是雌激素促進(jìn)骨質(zhì)疏松性骨折愈合可能的機(jī)制之一。