microRNA實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)服務(wù)

microRNA實(shí)時(shí)定量PCR/miRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR/實(shí)時(shí)熒光定量PCR/QPCR

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是在普通PCR反應(yīng)體系中加入熒光試劑，利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR進(jìn)程，zui后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR能夠?qū)Ｒ?、靈敏、快速、高重復(fù)性地精確定量起始模板濃度。成熟miRNA是由21-25個(gè)核苷酸組成的小RNA，由于長(zhǎng)度太短，不能通過(guò)傳統(tǒng)的實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)行檢測(cè)。本公司通過(guò)特殊設(shè)計(jì)的莖環(huán)結(jié)構(gòu)的反轉(zhuǎn)錄引物，配合實(shí)時(shí)定量PCR引物及探針可以精確檢測(cè)微量樣品中miRNA表達(dá)水平，也可以用終點(diǎn)PCR法定性檢測(cè)。

服務(wù)流程：
1.引物設(shè)計(jì)、合成
設(shè)計(jì)并合成目的miRNA的莖環(huán)RT引物、PCR引物和檢測(cè)用熒光探針，并合成該miRNA相應(yīng)的DNA寡核苷酸作為標(biāo)準(zhǔn)。
2.樣品RNA抽提
a．組織樣品：取適量（50～100mg）新鮮組織或正確保存的組織樣品，勻漿后用PURELINK^TM試劑抽提RNA。
b．細(xì)胞樣品：取1×10⁶～1×10⁷細(xì)胞，PBS清洗細(xì)胞，吸去PBS后用PURELINK^TM試劑抽提RNA。
3.RNA質(zhì)量檢測(cè)
a．紫外吸收測(cè)定法測(cè)定RNA在波長(zhǎng)260nm和280nm的吸收值，獲得RNA的濃度并通過(guò)A260/280及A260/230的吸收比值判斷RNA的純度。
b．甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA純度和完整性。
注：用于miRNA實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)的RNA樣品，必須高純度、完整，沒(méi)有RNase 污染（降解的樣品不能用于實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)），同時(shí)提取方法必須保證所得樣品包含完整的小RNA部分。
4.逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
利用莖環(huán)引物逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA*鏈。
5.實(shí)時(shí)定量PCR
以合成的cDNA作為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增，梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)同時(shí)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增，根據(jù)Ct值制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。以同樣的方法測(cè)定每個(gè)樣品中U6 snRNA含量作為內(nèi)參.
6.分析結(jié)果、提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告
分析實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量樣品中的目的miRNA。提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法，實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和圖表。

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
詳談，我們會(huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。

【本公司合作項(xiàng)目】
慢病毒，腺病毒，RNAi類(lèi)，分子生物實(shí)驗(yàn)，病理實(shí)驗(yàn)，免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)等，能夠進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)、毒理學(xué)評(píng)價(jià)、細(xì)胞藥篩、動(dòng)物建模、病理檢測(cè)、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量測(cè)序、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析服務(wù)！

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