細胞劃痕
服務(wù)原理 :
腫瘤細胞在體外仍具有遷移的能力。細胞劃痕法是測定了腫瘤細胞的運動特性的方法之一。其借鑒體外細胞致傷愈合實驗?zāi)P停隗w外培養(yǎng)的單層細胞上,劃痕致傷,然后比較不同實驗組中腫瘤細胞遷移的能力。
服務(wù)流程:
1.細胞培養(yǎng);
2.;
3.無血清/低血清培養(yǎng);
4.顯微鏡觀察拍照;
5.計算遷移率。
實驗步驟 :
實驗共分以下4個主要步驟:
1. 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞:
準備A549細胞,轉(zhuǎn)染前一天按照70-80%密度鋪在6cm培養(yǎng)皿中。16h后,按照轉(zhuǎn)染試劑說明書轉(zhuǎn)染細胞(8μg質(zhì)粒,20μL lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑) 。轉(zhuǎn)染24h后,重新鋪盤,密度為30-40%。
2. 劃線;
待細胞*貼壁后,用200μL tip輕輕劃線,垂直90度,用力均勻,確保劃線處無細胞。
3. 細胞培養(yǎng)及拍照;
每隔3天換一次新鮮培養(yǎng)基。連續(xù)幾天倒置顯微鏡下100X下拍照,記錄細胞的遷移情況,直到細胞填滿劃痕處。
4. 統(tǒng)計分析。
劃線兩側(cè)間距為average gaps(AGs),使用Image-Pro Plus軟件分析各組細胞的AGs。
收費標準/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。
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