慢病毒載體由于能夠在分裂以及非分裂細(xì)胞中穩(wěn)定的整合基因組，因此成為基因以及細(xì)胞治療中的一種有效工具。在過去的十幾年中慢病毒的生產(chǎn)以及純化技術(shù)已經(jīng)獲得了顯著的進(jìn)步，然而隨著市場(chǎng)規(guī)模的擴(kuò)大，對(duì)慢病毒純化的通量以及純度的要求日益增長(zhǎng)。對(duì)于各大企業(yè)來(lái)說，構(gòu)建具有成本效益的生產(chǎn)以及純化平臺(tái)具有十分重要的意義。

但是目前慢病毒載體的純化方法和經(jīng)驗(yàn)多是由抗體藥的純化方法和經(jīng)驗(yàn)發(fā)展過來(lái)的，然而LVV的衣殼直徑較大，在80-100 nm左右，比一般的病毒大得多，它的大小也在純化方面帶來(lái)了挑戰(zhàn)，所以標(biāo)準(zhǔn)的基于樹脂的分離方法因LVV太大而不能達(dá)到足夠的效果，因此需要純化它們，需要使用不同類型的吸附劑。此外，此外，與AAVs等病毒相比，LVV往往更不穩(wěn)定。LVV包膜在功能方面扮演著重要的角色，包括轉(zhuǎn)導(dǎo)和嗜性。但這一功能受到各種處理?xiàng)l件的負(fù)面影響，如溫度、pH、生物處理過程中液體的離子強(qiáng)度的變化。介于此，Astrea Bioseparations 的科學(xué)家，基于自身的純化和產(chǎn)品開發(fā)經(jīng)驗(yàn)，開發(fā)了專門針對(duì)病毒純化的Nereus 系列產(chǎn)品，目前最先推出的是針對(duì)慢病毒純化的LentiHERO.

下面就跟大家隆重介紹一下我們的這款慢病毒純化的產(chǎn)品--LentiHERO
Nereus LentiHERO™主要基于AstreAdept™基架和離子交換原理。

1.什么是AstreAdept™？
AstreAdept™是一種新型納米纖維材料，不同于傳統(tǒng)凝膠介質(zhì)，它能通過快速的對(duì)流模式迅速捕獲大量的目的蛋白，使得工藝運(yùn)行流速不再受限于凝膠孔徑大小。Astrea將這項(xiàng)技術(shù)整合到離心柱中，以將這些優(yōu)勢(shì)帶到實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的病毒載體純化中。

2.Nereus LentiHERO™，5步離心快速慢病毒純化

無(wú)需昂貴設(shè)備，簡(jiǎn)單幾步即可實(shí)現(xiàn)慢病毒的純化，配合真空設(shè)備，可實(shí)現(xiàn)多個(gè)樣品的同步處理。讓純化像DNA提取一樣簡(jiǎn)單。

3.高動(dòng)態(tài)結(jié)合載量
15%穿透時(shí)，每根離心柱的動(dòng)態(tài)結(jié)合載量為1.9E+10

Nereus LentiHERO™小柱以20 mv/min的速度上樣，流穿收集在10mL液體中，使用p24 ELISA分析，基于上樣的總VP，計(jì)算VP穿透百分比

4.高回收率，無(wú)血清培養(yǎng)體系大于60%

有無(wú)血清培養(yǎng)體系慢病毒回收率：純化后樣品中慢病毒/病毒原液%。血清(-) n=3，血清(+)n=2

5.高效去除宿主蛋白殘留
減少95%的宿主細(xì)胞蛋白污染物
通過SDS-PAGE，洗脫液中檢測(cè)不到宿主細(xì)胞蛋白
宿主細(xì)胞蛋白大大減少，無(wú)論進(jìn)樣中是否存在血清

6.功能、形態(tài)不受影響
重要蛋白，如Gag、編碼衣殼、基質(zhì)和核衣殼的大小不受影響
用Nereus LentiHERO™純化的洗脫慢病毒的顆粒大小和形態(tài)不受影響
純化慢病毒顆粒的感染性不受影響

Western blot分析使用兔多克隆抗p24 IgG檢測(cè)LV特異性p24 Gag蛋白。LV洗脫物的兩個(gè)重復(fù)分析如泳道 1和 2所示。gag蛋白，如p24，在24 kDa左右被發(fā)現(xiàn)，另一個(gè)主要的gag蛋白p55在55 kDa左右。這種結(jié)果與截留分子量 (100kDa) 過濾法濃縮的LV相同 (數(shù)據(jù)未顯示)。

和同類產(chǎn)品比較在純度，得率和純化速率上面均有較大的優(yōu)勢(shì)


Nereus LentiHERO™ 性能總結(jié)
① 基于新型納米復(fù)合纖維膜技術(shù) - AstreAdept™ —— 賦能
② 易于使用的設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)功能性慢病毒顆粒的快速純化和高回收率
③ 宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留去除95%以上
④ 同時(shí)處理多個(gè)樣品，降低病毒載體開發(fā)樣品制備的瓶頸
⑤ 實(shí)現(xiàn)10以上倍體積濃縮

通過助力研究人員加速細(xì)胞和基因療法的開發(fā)，該技術(shù)提供了一種更具成本和時(shí)間效益的方式，以加快向有需要的患者提供創(chuàng)新療法。

實(shí)驗(yàn)室研發(fā)離心柱產(chǎn)品Nereus LentiHERO™已于9月29號(hào)美國(guó)BPI會(huì)議期間上市。研發(fā)設(shè)備配套AstreaAdept™技術(shù)解決基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域工藝開發(fā)，小試以及生產(chǎn)規(guī)模的技術(shù)瓶頸。生產(chǎn)規(guī)模產(chǎn)品預(yù)計(jì)在2023年推出。

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