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產(chǎn)品名稱:STEMCELL Lymphoprep密度梯度分離液
產(chǎn)品貨號:07851
英文名稱:Lymphoprep Density gradient medium for the isolation of mononuclear cells
產(chǎn)品規(guī)格:250ml/500ml
產(chǎn)品介紹:
Lymphoprep™ 是一種密度梯度培養(yǎng)基,推薦用于利用細胞密度的差異從外周血、臍帶血和骨髓中分離單核細胞。粒細胞和紅細胞的密度高于單核細胞,因此在離心過程中會通過 Lymphoprep™ 層沉淀。Lymphoprep™ 可替代 Ficoll-Paque™,無需更改您現(xiàn)有的方案,并且與 SepMate™ 和 RosetteSep™ *兼容。
Lymphoprep™ 的密度為 1.077 g/mL。
工作原理:
PBMC與血液中的其他成分存在密度差異,利用密度在1.077±0.001g/ml之間而且近于等滲的LymphoprepTM溶液作密度梯度離心時,紅細胞和粒細胞由于密度大,故沉于分離液底部。PBMC密度稍低于分離液,故位于分離液界面上,獲得PBMC。LymphoprepTM分離液含有多糖(polysacccharide),多糖能粘附在細胞表面,使紅細胞和粒細胞聚集下沉,但它對淋巴細胞的活性和紅細胞和粒細胞進一步分離有負面影響。
產(chǎn)品參數(shù):
亞型 密度梯度介質(zhì)
細胞類型 單核細胞
物種 人類
樣本來源 骨髓、臍帶血、全血
應(yīng)用 細胞分離
品牌 淋巴制劑
產(chǎn)品組分:
泛影酸鈉 (9.1% w/v)
• 多糖 (5.7% w/v)
• 其他成分
產(chǎn)品使用說明
第一步
在含有抗凝劑(EDTA、heparin、或ACD)的管子內(nèi)收集血液,或者用去纖維蛋白的血液。此處抗凝劑的選擇取決于得到淋巴細胞以后,后續(xù)實驗的要求,一般選取EDTA即可。
第二步
用等體積的0.9%的NaCl溶液(即生理鹽水)稀釋血液。
第三步
在12-15ml的離心管內(nèi),將6ml稀釋后的血液鋪在3ml分離介質(zhì)Lymphoprep上。
此處鋪層可以采用從上面鋪,或從下面鋪兩種方法。鋪層的關(guān)鍵是不能讓血液和分離液混在一起,要界面分層清晰。
第四步
在室溫下——20攝氏度左右,用水平轉(zhuǎn)子,800g的離心力,離心20分鐘。(如果血液存放時間超過2小時——從人體抽出算起,離心時間延長為30分鐘)。
第五步
離心前和離心后,離心管內(nèi)液體分層如下圖所示。
離心后,離心管內(nèi)位于血液和分離液界面處的明顯的一層即為淋巴細胞層。
用移液管直接吸取淋巴細胞層,注意,不要去除上面的血液層,而是直接吸取。移至另一離心管中。
第六步
用大約2倍體積的0.9%的NaCl溶液(生理鹽水)稀釋收集到的淋巴細胞,在250g-300g的離心力下,離心10分鐘,(此處在加上稀釋液后的體積在15ml離心管內(nèi)不宜超過5-6ml,體積過大,會降低淋巴細胞的產(chǎn)率),收集沉淀,即得到所需的人外周血單個核細胞,即可用于后續(xù)的實驗。
產(chǎn)品訂購信息:
品牌 貨號 名稱 規(guī)格
STEMCELL 07851 Lymphoprep密度梯度分離液 250ml/500ml
產(chǎn)品名稱:STEMCELL Lymphoprep密度梯度分離液
產(chǎn)品貨號:07851
關(guān)于公司:
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