CellArits授權(quán) iPSC單細(xì)胞克隆培養(yǎng)基試劑盒

產(chǎn)品名稱：Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit         

產(chǎn)品貨號：Y30021

產(chǎn)品說明：

使用CRISPR / Cas9和人類誘導(dǎo)的多能干細(xì)胞（hiPS）進(jìn)行精確，無足跡的基因編輯的*組合，可在產(chǎn)生疾病模型時提高復(fù)雜性，從而促進(jìn)新療法的快速發(fā)展。

我們的CRISPR / Cas9系統(tǒng)是介導(dǎo)哺乳動物細(xì)胞中基因組編輯的一種簡單的，RNA可編程的方法；它可用于在hiPS細(xì)胞中產(chǎn)生基因敲除（通過插入/刪除）或敲除（通過HDR）。交付Cas9-sgRNA核糖核蛋白（RNP）復(fù)合物后，必須分離單個細(xì)胞并將其擴(kuò)增為克隆細(xì)胞系，以分離和篩選目標(biāo)基因型。傳統(tǒng)上，從作為集落生長和傳代的經(jīng)過編輯的hiPS細(xì)胞建立克隆種群效率低下且耗時。通常，它會導(dǎo)致細(xì)胞死亡或過早分化。為克服這一挑戰(zhàn)，我們開發(fā)了完整的系統(tǒng)，該系統(tǒng)通過有效傳遞Cas9-sgRNA RNP復(fù)合物和hiPS細(xì)胞的單細(xì)胞克隆，將無足跡的基因編輯結(jié)合在一起。使用我們基于單層的培養(yǎng)系統(tǒng)可成功完成單細(xì)胞克隆

產(chǎn)品介紹：

人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（Human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)是一個功能強(qiáng)大的研究工具和疾病模型，因為其具備增殖、自我更新、分化為多種細(xì)胞類型的能力。此外，人iPS細(xì)胞還可以再現(xiàn)細(xì)胞來源個體的疾病表型和基因型。將人iPS細(xì)胞結(jié)合基于CRISPR/Cas9的基因編輯技術(shù)，可以在同基因的細(xì)胞系中研究特定基因改變引起的功能影響，因為基因編輯過的人iPS細(xì)胞能提供可再生的、無遺傳變異的患病細(xì)胞和健康細(xì)胞資源。

CRISPR/Cas9系統(tǒng)已經(jīng)成為一個強(qiáng)大的基因編輯工具，因為其高的靶向特異性，編輯效率和易用性。該技術(shù)的強(qiáng)大主要源于它的簡單，因為全部只需要一個Cas9核酸酶結(jié)合一個單鏈向?qū)NA（single guide RNA，sgRNA) 就可以決定靶向特異性（Jinek et al. 2012)。這種RNA編程的（RNA-programmable）方法利用了非同源末端連接(non-homologous end joining，NHEJ) DNA修復(fù)途徑的易錯特性，進(jìn)而產(chǎn)生基因敲除(通過插入/刪除)。這種方法也可以通過同源重組（homology-directed repair，HDR)途徑被用于基因敲入。

 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的組件可以通過多種方法成功導(dǎo)入至靶細(xì)胞，包括基于載體的表達(dá)系統(tǒng)，RNA轉(zhuǎn)染, 導(dǎo)入Cas9/sgRNA核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP)復(fù)合物(Sander and Joung 2014)等。與基于載體的方法相比，直接導(dǎo)入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種快速轉(zhuǎn)入基因編輯實驗的方法，同時脫靶效應(yīng)的可能性更?。↘im et al. 2014)。

 一旦Cas9/sgRNA RNP復(fù)合物被導(dǎo)入，為了分離和篩選感興趣的基因型，單細(xì)胞必須被分離并擴(kuò)增為克隆細(xì)胞系。傳統(tǒng)上,從基因編輯的hiPS細(xì)胞建立一個克隆群是低效的、具有挑戰(zhàn)性的和耗時的，因為hiPS 細(xì)胞是以集落生長和傳代的。通常，這會導(dǎo)致細(xì)胞死亡和提前分化。然而，Cellartis基因編輯和單細(xì)胞克隆系統(tǒng)包含一個成分確定的培養(yǎng)系統(tǒng)(由基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包被劑，和添加劑組成)，用于有效形成單細(xì)胞克隆和擴(kuò)增基因編輯后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一個基于單層培養(yǎng)的系統(tǒng)，規(guī)避了集落狀培養(yǎng)帶來的挑戰(zhàn)，允許單細(xì)胞傳代和促進(jìn)接種的單細(xì)胞存活和后續(xù)擴(kuò)增。

 Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個完整的，在無飼養(yǎng)層和成分確定條件下，用于hiPSCs有效擴(kuò)增和擴(kuò)大生產(chǎn)的系統(tǒng)。試劑盒包含了從接種單細(xì)胞至96孔板到擴(kuò)增至48孔板過程中所有必要的試劑。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

 Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643) 是一個完整的系統(tǒng)，允許通過電穿孔的方法對hiPSCs進(jìn)行有效的基因編輯以及隨后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增至48孔板。該系統(tǒng)中提供了重組Cas9蛋白質(zhì)，以及產(chǎn)生大量sgRNAs所有必要的試劑，用于電穿孔hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (前面所述) 組份，用于進(jìn)行基因編輯后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

 Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)是一個完整的系統(tǒng)，允許通過gesicle導(dǎo)入Cas9/sgRNA復(fù)合物進(jìn)行有效的基因編輯隨后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增至48孔板。Gesicles是一種無毒的、高效的、替代電穿孔的方法，不依賴昂貴的設(shè)備或耗材。系統(tǒng)中提供所有的必要試劑用于產(chǎn)生細(xì)胞衍生的納米囊泡（稱做gesicles），來轉(zhuǎn)導(dǎo)Cas9和sgRNA至hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit（前面所述）組份，用于進(jìn)行基因編輯后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

 ■ 產(chǎn)品特點

·在hiPSC中進(jìn)行高效的基因編輯—使用電穿孔或囊泡來遞送Cas9蛋白和sgRNA，而沒有基因組整合并且降低脫靶效應(yīng)

·優(yōu)異的單細(xì)胞存活率—編輯的hiPSC植入96孔板中的單個細(xì)胞

·編輯后和單細(xì)胞克隆期間保持多能性-hiPSC維持多能性標(biāo)記Oct-4，TRA-1-60和SSEA-4的高水平（> 90％）

·穩(wěn)定的核型從頭到尾—在編輯，單細(xì)胞克隆和擴(kuò)增過程中保持正常且穩(wěn)定的核型

·靈活地按自己的方式進(jìn)行基因編輯實驗-選擇完整的試劑盒，該試劑盒可以使用基于電穿孔的（Code No. 632643）或基于囊泡的（Code No. 632642）CRISPR / Cas9技術(shù)提供編輯和單細(xì)胞克隆解決方案，或者在您自己的編輯實驗后，利用培養(yǎng)基試劑盒（代碼Y30021）執(zhí)行有效的單細(xì)胞克隆

·在整個基因編輯/單細(xì)胞克隆實驗中繼續(xù)使用DEF-CS技術(shù)-使用Cellartis DEF-CS 500培養(yǎng)系統(tǒng)（代碼編號Y30010）在基因編輯實驗之前和之中，然后在單細(xì)胞克隆實驗之后放大期間

產(chǎn)品名稱：CellArits授權(quán) iPSC單細(xì)胞克隆培養(yǎng)基試劑盒        產(chǎn)品貨號：Y30021

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CellArtis  Y30010     DEF-CS 500 Culture System,DEF-CS 500培養(yǎng)系統(tǒng)，人iPS和人ES增殖用培養(yǎng)基  1套

CellArtis  Y30021     Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit           1套

CellArtis  Y40030     GS2-M小鼠 iPS/ES干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基                                     1套

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Cellartis品牌擁有超過15年的豐富經(jīng)驗，可為涉及干細(xì)胞的研究應(yīng)用提供產(chǎn)品和服務(wù)。該品牌源自同名公司（現(xiàn)為Takara Bio Europe AB），該公司由哥德堡大學(xué)的研究人員于2001年成立。從歷*看，Cellartis品牌的主要關(guān)注點是開發(fā)和分配干細(xì)胞系，包括用于人類或普通用途的人類胚胎干細(xì)胞（hESCs）和人類誘導(dǎo)的多能干細(xì)胞（hiPSC）。近，該品牌的范圍已擴(kuò)大到還包括諸如培養(yǎng)系統(tǒng)，培養(yǎng)基和試劑之類的產(chǎn)品，這些產(chǎn)品使我們的專業(yè)知識和創(chuàng)新技術(shù)更容易為生命科學(xué)研究人員所使用。該品牌的重要里程碑涉及Cellartis DEF-CS培養(yǎng)系統(tǒng)的開發(fā)和商業(yè)化，這是一種培養(yǎng)干細(xì)胞的革命性方法，相對于其他方法，它具有明顯的優(yōu)勢。

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重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司是中國中西部地區(qū)*家專業(yè)從事生物技術(shù)產(chǎn)品銷售（包括：生物試劑、生物耗材、儀器設(shè)備、技術(shù)產(chǎn)品等）、干細(xì)胞儲存、干細(xì)胞相關(guān)基礎(chǔ)研究、干細(xì)胞臨床應(yīng)用研究及技術(shù)服務(wù)的高新技術(shù)企業(yè)。供應(yīng)造血干細(xì)胞培養(yǎng)基，神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，胚胎/IPS干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，心肌細(xì)胞分化培養(yǎng)基，外周血核型分析培養(yǎng)基。公司立足西南，面向全國，以“積極借鑒成功經(jīng)驗，追求創(chuàng)新”為核心思想，將為客戶提供水平的干細(xì)胞產(chǎn)品和服務(wù)。

“華雅干細(xì)胞”是由我們公司的全體員工用心打造的一塊金質(zhì)招牌，我們的團(tuán)隊：富有激情、相互信任、目標(biāo)*、熱愛干細(xì)胞事業(yè)、用心為我們的干細(xì)胞客戶服務(wù)。干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展需要產(chǎn)業(yè)鏈中的每個成員精耕細(xì)作，協(xié)同發(fā)展，實踐創(chuàng)新。

華雅干細(xì)胞公司立志為中國干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)的進(jìn)步與發(fā)展做出應(yīng)有的貢獻(xiàn)，為人類健康事業(yè)更上一層樓而不懈努力！

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