關鍵詞:細胞培養(yǎng)技術服務|實驗技術服務
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細胞培養(yǎng)技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序實驗流程：
生存期
在細胞一代中，細胞能倍增3～6次，經(jīng)歷三個階段：
潛伏期(latent phase) ：
接種 經(jīng)過 懸浮期(細胞質回縮,胞體呈圓球形) 貼壁。
初代培養(yǎng)細胞 經(jīng)過 10～24小時或更多時間。
連續(xù)細胞系和癌細胞系 經(jīng)過 10～30分鐘 貼附。
貼附現(xiàn)象是一個非常復雜和受多種因素的影響。
影響細胞貼附：底物表面不干凈，影響細胞貼附。
利于細胞貼附：底物表面帶有陽性物質與特殊物質:
纖粘連蛋白(fibronectin FN)、
細胞表面蛋白(cell surface proteinCSP)
這些物質有的存在與細胞表面,有的來自血清。
潛伏期特點：
長短與細胞接種密度、種類、使用的培養(yǎng)基性質有關。
(1)細胞貼附后進入潛伏期,細胞無增殖。少見分裂相，細胞有運動活動。
(2)初代培養(yǎng) 細胞潛伏期約為24～96小時或更長，
連續(xù)細胞系和腫瘤細胞潛伏期約6～24小時。
(3)細胞接種密度大潛伏期短。
(4)細胞出現(xiàn)分裂相增多時，標志細胞進入指數(shù)增生期。
細胞分裂指數(shù)：
初代細胞：在0.1%～0.5%之間% ,
連續(xù)分裂細胞和腫瘤細胞：3 ～5%。
指數(shù)增生期是作為細胞一代活力的時期,是進行實驗和zui主要的階段。
指數(shù)增生期持續(xù)3～5天，細胞數(shù)量增多后生長空間變小，細胞相互接觸可連接成片。
正常細胞：細胞相互接觸能抑制細胞運動，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制(contact inhibition)。
腫瘤細胞：沒有這種現(xiàn)象，可作為區(qū)別正常與腫瘤細胞的標志之一。當腫瘤細胞達到一定密度后向三維空間發(fā)展，使細胞發(fā)生堆積(piled up)。
由于細胞不斷增殖分裂，細胞數(shù)量持續(xù)增多，培養(yǎng)液的營養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多，細胞受營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制(Density inhibition),導致細胞分裂停止。
停滯期(stagnate phase)
細胞量和密度達到飽和，細胞停滯增殖。表明細胞進入到停滯期,細胞數(shù)量持平，也稱為平頂期(plateau）。
特點：細胞不增殖,有代謝活動。培養(yǎng)液中的營養(yǎng)已逐漸耗盡,代謝產(chǎn)物積累增多,pH降低，此時需要傳代,否則細胞將會中毒,發(fā)生形態(tài)改變,細胞會從底物脫落死亡。
注意：
傳代過晚將影響下一代細胞的生長,至少要再傳 1～2代 ,通過換液淘汰死細胞和受損較輕的細胞。待細胞全部恢復后再用。