島津SPE小柱在食品中四環(huán)素類殘留的檢測

方法一：依據(jù)GBT21317-2007

1. 前處理（以牛肉為例）

取已經勻漿好的牛肉5g（到0.01g），置于50ml離心管中，加入50ul，10ppm的混標，保證每kg肉中含1mg標樣。
分別加入20ml、20ml、10ml 0.1mol/L EDTA-Mallvaine緩沖液冰水浴中超聲10min后取出，3000r/min下離心5min，合并上清液，定容至50ml，離心，取上清液，混勻，待凈化。

Mallvaine緩沖液配制：將500ml 0.1mol/L 檸檬酸溶液與312.5 ml 0.2mol/L 磷酸氫二納溶液混合，NaOH溶液調節(jié)pH值至4.0+/- 0.05
0.1mol/L EDTA-Mallvaine緩沖液配制：稱取30.25g乙二胺四乙酸二鈉放入812.5 ml Mallvaine緩沖液中，使其溶解，混勻。 

固相萃取小柱：
InertSep Pharma （3ml/60mg或6ml/500mg）WondaSep HLB 3ml/60mg均可 

SPE方法：
活化/平衡：5ml甲醇、5ml水
上樣：50ml待測液中準確取10ml過柱
清洗：5ml水、5ml甲醇：水=1：19
小柱脫水干燥
洗脫：10ml甲醇：乙酸乙酯=1：9
將洗脫液氮吹至干，用流動相定容至1ml，過濾，待測。

2. 色譜分析

色譜柱：InertSustain C18 5um 4.6*250mm
流動相：乙腈：甲醇：0.01%草酸溶液=2：1：7
流速：1.0ml/min
柱溫：25℃
進樣量：60 ul
檢測波長：350nm
儀器：Shimadzu LC-20A

3. 實驗結果

基質加標濃度為 1mg/kg，3次平行實驗結果如下：

代表圖譜

4. 結論

在此實驗條件下，采用固相萃取小柱InertSep Pharma對牛肉中四環(huán)素、土霉素、金霉素進行加標回收率實驗，回收率*要求。

方法二：島津技邇改進的方法

1. 前處理（以牛肉為例）

取已經勻漿好的牛肉5g（到0.01g），置于50ml離心管中，加入50ul，10ppm的混標，保證每kg肉中含1mg標樣。
分別加入30ml、20ml EDTA-Mallvaine緩沖液冰水浴中超聲10min后取出，3000r/min下離心5min，合并上清液，定容至50ml，離心，取上清液，混勻，待凈化。

EDTA-Mallvaine緩沖液配制：取 307ml 0.1mol/L 檸檬酸溶液 和 193ml 0.5mol/L Na2HPO4混勻，再加入1.86g Na2 EDTA。 

固相萃取小柱：
InertSep PLS-2 20ml/265mg 

SPE方法：
活化/平衡：10ml甲醇、10ml水、5ml Na2EDTA緩沖液
上樣：50ml待測液過柱
清洗：10 ml水
小柱脫水干燥
洗脫：10ml甲醇
將洗脫液氮吹至干，用流動相定容至1ml，過濾，待測。 

2. 色譜分析

同方法一 

3. 實驗結果 

基質加標濃度為 1mg/kg，3次平行如下：

4. 島津技邇改進的方法優(yōu)勢
InertSep PLS-2 20ml/265mg 小柱規(guī)格大，不需要抽負壓即可自然滴落，操作更方便，且回收率高。