島津SPE小柱在食品中四環(huán)素類殘留的檢測(cè)

方法一：依據(jù)GBT21317-2007

1. 前處理（以牛肉為例）

取已經(jīng)勻漿好的牛肉5g（到0.01g），置于50ml離心管中，加入50ul，10ppm的混標(biāo)，保證每kg肉中含1mg標(biāo)樣。
分別加入20ml、20ml、10ml 0.1mol/L EDTA-Mallvaine緩沖液冰水浴中超聲10min后取出，3000r/min下離心5min，合并上清液，定容至50ml，離心，取上清液，混勻，待凈化。

Mallvaine緩沖液配制：將500ml 0.1mol/L 檸檬酸溶液與312.5 ml 0.2mol/L 磷酸氫二納溶液混合，NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0+/- 0.05
0.1mol/L EDTA-Mallvaine緩沖液配制：稱取30.25g乙二胺四乙酸二鈉放入812.5 ml Mallvaine緩沖液中，使其溶解，混勻。 

固相萃取小柱：
InertSep Pharma （3ml/60mg或6ml/500mg）WondaSep HLB 3ml/60mg均可 

SPE方法：
活化/平衡：5ml甲醇、5ml水
上樣：50ml待測(cè)液中準(zhǔn)確取10ml過(guò)柱
清洗：5ml水、5ml甲醇：水=1：19
小柱脫水干燥
洗脫：10ml甲醇：乙酸乙酯=1：9
將洗脫液氮吹至干，用流動(dòng)相定容至1ml，過(guò)濾，待測(cè)。

2. 色譜分析

色譜柱：InertSustain C18 5um 4.6*250mm
流動(dòng)相：乙腈：甲醇：0.01%草酸溶液=2：1：7
流速：1.0ml/min
柱溫：25℃
進(jìn)樣量：60 ul
檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm
儀器：Shimadzu LC-20A

3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

基質(zhì)加標(biāo)濃度為 1mg/kg，3次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

代表圖譜

4. 結(jié)論

在此實(shí)驗(yàn)條件下，采用固相萃取小柱InertSep Pharma對(duì)牛肉中四環(huán)素、土霉素、金霉素進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，回收率*要求。

方法二：島津技邇改進(jìn)的方法

1. 前處理（以牛肉為例）

取已經(jīng)勻漿好的牛肉5g（到0.01g），置于50ml離心管中，加入50ul，10ppm的混標(biāo)，保證每kg肉中含1mg標(biāo)樣。
分別加入30ml、20ml EDTA-Mallvaine緩沖液冰水浴中超聲10min后取出，3000r/min下離心5min，合并上清液，定容至50ml，離心，取上清液，混勻，待凈化。

EDTA-Mallvaine緩沖液配制：取 307ml 0.1mol/L 檸檬酸溶液 和 193ml 0.5mol/L Na2HPO4混勻，再加入1.86g Na2 EDTA。 

固相萃取小柱：
InertSep PLS-2 20ml/265mg 

SPE方法：
活化/平衡：10ml甲醇、10ml水、5ml Na2EDTA緩沖液
上樣：50ml待測(cè)液過(guò)柱
清洗：10 ml水
小柱脫水干燥
洗脫：10ml甲醇
將洗脫液氮吹至干，用流動(dòng)相定容至1ml，過(guò)濾，待測(cè)。 

2. 色譜分析

同方法一 

3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 

基質(zhì)加標(biāo)濃度為 1mg/kg，3次平行如下：

4. 島津技邇改進(jìn)的方法優(yōu)勢(shì)
InertSep PLS-2 20ml/265mg 小柱規(guī)格大，不需要抽負(fù)壓即可自然滴落，操作更方便，且回收率高。