ACE色譜柱超惰性固定相對生物分子反相HPLC的益處
提高靈敏度
將TFA（三fo乙酸）用作肽類和蛋白質(zhì)反相分離的流動相添加劑。
該添加劑通常被用于改善肽類和蛋白質(zhì)復(fù)雜混合物的峰形和分離度。

如下圖所示，在流動相中使用0.1％TFA可以使填充有活性固定相的色譜柱產(chǎn)生與由超惰性固定相制備的新一代色譜柱相當(dāng)?shù)姆鍖挕?/p>

然而，隨著TFA濃度降低至0.01％以及終的0.005％，超惰性相上的峰寬保持不變，但活性固定相上的峰寬會發(fā)生變形。
使用極低水平TFA分析肽類和蛋白質(zhì)的能力有利于采用質(zhì)譜法進(jìn)行高靈敏度檢測。

TFA可與多肽形成復(fù)合物合并增強(qiáng)選擇性。然而，該相同的復(fù)合作用會降低質(zhì)譜儀的靈敏度。

用于肽類和蛋白質(zhì)分析的ACE 300Å色譜柱

蛋白質(zhì)
條件
色譜柱：ACE 5 C18-300, 250 x 4.6mm
流速：1.0ml/min
溫度：環(huán)境
流動相：A. 0.1% TFA（溶于水中） B. 0.1% TFA（溶于乙腈中），30分鐘內(nèi) 5%-70% B
檢測：UV, 280nm

化合物
1. 核糖核酸酶A
2. 細(xì)胞色素C
3. 全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白
4. 脫輔基肌紅蛋白

肽類

條件
色譜柱：ACE 5 C18-300, 250 x 4.6mm
流速：1.0ml/min
溫度：環(huán)境
流動相：A. 0.1% TFA（溶于水中）B. 0.1% TFA（溶于乙腈中），25分鐘內(nèi)10%-40% B
檢測：UV, 220nm

化合物
1. 甘氨酸-酪氨酸
2. 催產(chǎn)素
3. 血管緊張素II
4. 神經(jīng)降壓素

靈敏度和峰形，隨TFA的濃度而變化

色譜柱：250 x 4.6mm, 5μm C18 300Å
流動相：A：TFA（溶于水中） B： 溶于乙腈中的TFA（按照上述說明為％TFA），37.5分鐘內(nèi)10％-55％B。
流速：1.5mL/min
檢測：UV 200nm

化合物
1. 甘氨酸-酪氨酸
2. 催產(chǎn)素
3. 血管緊張素II
4. 神經(jīng)降壓素

隨著TFA濃度的降低，低純度硅膠色譜柱（右圖）顯示性能急劇下降。
由超惰性硅膠制成的色譜柱（如ACE）會在TFA濃度降低時(shí)保持性能。

備注：比較性分離物不代表所有應(yīng)用。