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超惰性固定相對生物分子反相HPLC的益處介紹Ⅱ - 優(yōu)化選擇性

2019-5-22  閱讀(470)

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ACE色譜柱超惰性固定相對生物分子反相HPLC的益處

 

優(yōu)化選擇性
TFA和其他流動相添加劑與肽類和蛋白質(zhì)的復(fù)合能力可用于調(diào)節(jié)選擇性并改善分離度。如下圖所示,將TFA濃度從0.1%降低至0.01%可使血管緊張素II和III實現(xiàn)分離。

在超惰性ACE色譜柱的情況下,隨著分離度的顯著改善,峰形和靈敏度保持恒定。在Vydac色譜柱(填充有更具活性的固定相)的情況下,峰形被嚴重破壞。

 

選擇性,隨TFA的濃度而變化

色譜柱:250 x 4.6mm, 5μm C18 300Å
流動相:A:TFA(溶于水中)B: 80%TFA(溶于乙腈中),20%TFA(溶于水中),(按照上述說明為%TFA),15分鐘內(nèi)25%-40%B
流速:1.0 mL/min

檢測:UV 215nm
化合物:

1.血管緊張素II
2.血管緊張素III
3.血管緊張素I

ACE 5 C18-300
超惰性硅膠

Vydac 218TP
低純度“活性”硅膠


通過降低TFA濃度來改善分離度。由低品質(zhì)硅膠制成的色譜柱顯示其性能降低。

備注:比較性分離物不代表所有應(yīng)用。

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