ACE色譜柱超惰性固定相對(duì)生物分子反相HPLC的益處

增加PH范圍
大多數(shù)生物分子是帶電荷的。

肽類(lèi)和蛋白質(zhì)帶有多種電荷。從小分子的經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，已流動(dòng)相pH可以成為改變保留值并因此而優(yōu)化帶電化合物分離度的有力工具。

肽類(lèi)也是如此。

再次以使用血管緊張素II和III作為實(shí)例，下圖顯示在pH=2的條件下，ACE超惰性色譜柱或填充有更具活性固定相的色譜柱上這兩種肽未實(shí)現(xiàn)分離。

通過(guò)將pH增加至7，這兩種色譜柱則均能提供良好的分離度。

然而，盡管ACE超惰性色譜柱保持了良好的峰形，但填充低純度硅膠的色譜柱顯示其峰形較差和性能損失。

在極性化合物的許多反相應(yīng)用中觀察到了這種現(xiàn)象。

在中等pH值時(shí)，硅醇相互作用更為普遍，因此峰拖尾在活性固定相上變得更加明顯。

流動(dòng)相pH對(duì)分離度的影響

色譜柱：250 x 4.6mm, 5μm C18 300Å
流動(dòng)相：

pH 2 A：0.1% TFA（溶于水中） B: 0.1% TFA（溶于乙腈中）
pH 7 A: 10mM NH4OAc（溶于水中） B: 乙腈 15分鐘內(nèi)25%-40% B
流速：1.0 mL/min

檢測(cè)：UV 215nm
化合物：

1.血管緊張素II
2.血管緊張素III
3.血管緊張素I

調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH是提高選擇性的有力工具。只有基于超純硅膠的色譜柱才能在更高的pH值下保持性能。

備注：比較性分離物不代表所有應(yīng)用。