熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡不同，它不是通過(guò)普通光源的照明觀察標(biāo)本，而是利用一定波長(zhǎng)的光(通常是紫外光、藍(lán)紫光)激發(fā)顯微鏡下標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)，使之發(fā)射熒光，所以，熒光顯微鏡的光源所起的作用不是直接照明，而是作為一種激發(fā)標(biāo)本的內(nèi)熒光物質(zhì)的能源。我們之所以能觀察標(biāo)本，不是由于光源的照明，而是標(biāo)本內(nèi)熒光物質(zhì)吸收激發(fā)的光能后所呈現(xiàn)的熒光現(xiàn)象。由此可知，熒光顯微鏡的特點(diǎn)，主要是它的光源能供給大量特定波長(zhǎng)范圍的激發(fā)光，使受檢標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)能獲得必要強(qiáng)度的激發(fā)光。同時(shí)，熒光顯微鏡必須具備相應(yīng)的濾光鏡系統(tǒng)。熒光顯微鏡是免疫熒光組織化學(xué)的基本工具。它是由超高壓光源、濾片系統(tǒng)(包括激發(fā)和壓制濾板)、光學(xué)系統(tǒng)和攝影系統(tǒng)等主要部件組成，是利用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光。
1.激發(fā)熒光的方式：按光的波長(zhǎng)范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線照明法)和BV激發(fā)法(使用藍(lán)紫光)兩種。UV激發(fā)法是用短于400nm的近紫外光進(jìn)行激發(fā)。該法不存在可見的激發(fā)光，所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光，容易判別標(biāo)本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。
2.BV激發(fā)法：是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍(lán)光進(jìn)行激發(fā)。該方法使用藍(lán)光照射標(biāo)本，所以熒光觀察系統(tǒng)的截止濾光片必須使用可*阻斷藍(lán)光并可充分通過(guò)所需綠、黃熒光的濾光片。用于熒光抗體法的熒光色素。對(duì)于激發(fā)光的極大吸收波長(zhǎng)和熒光的極大發(fā)光波長(zhǎng)比較接近，所以BV激發(fā)法使用的濾光片必須使用銳截止式濾光片。該法可用藍(lán)光作為激發(fā)光，所以熒光色素的吸收效率較高，可得到較明亮的圖像。其缺點(diǎn)是500nm以下的熒光無(wú)法看到，而500nm以上的使整個(gè)圖像顯黃色。在熒光抗體法中，大多以熒光色素*的顏色來(lái)判斷其特異性，所以在討論微妙的特異性時(shí)，上述BV激發(fā)法的缺點(diǎn)往往影響極大。
開啟顯微鏡汞燈；
.根據(jù)樣品標(biāo)記的熒光素選擇相應(yīng)的濾光片；
.放好樣品，找到合適的視野；
.如需拍照，請(qǐng)確認(rèn)照相機(jī)內(nèi)已裝好彩色膠卷(使用定膠卷)；
.開啟自拍裝置，選擇手動(dòng)檔，通常拍攝速度在0.---0秒內(nèi)；
.使用結(jié)束，關(guān)閉所有電源并做好使用記錄。
.如需詳細(xì)說(shuō)明，請(qǐng)借閱說(shuō)明書。
注：
A．為延長(zhǎng)汞燈的使用壽命，汞燈開啟不到分鐘的請(qǐng)?jiān)诜昼姾箨P(guān)閉汞燈。
B．在熒光狀態(tài)下觀察標(biāo)本，標(biāo)本內(nèi)的熒光染色會(huì)較快的衰減，所以要避免長(zhǎng)時(shí)間的在熒光下觀察
