總谷胱甘肽過氧化物酶檢測試劑盒

   本試劑盒是一種簡單易行的通過紫外比色來檢測細(xì)胞、組織或其它樣品中谷胱甘肽過氧化物酶活性的試劑盒。絕大部分細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽過氧化物酶都是含硒的，且硒為該酶的活性中性組成部分。細(xì)胞內(nèi)也有很少量的不含硒的谷胱甘肽過氧化物酶存在。本試劑盒可以定量檢測出比較常見的含硒的谷胱甘肽過氧化物酶和少量不含硒的谷胱甘肽過氧化物酶的總量。本試劑盒可檢測組織勻漿產(chǎn)物、細(xì)胞裂解產(chǎn)物等樣品中谷胱甘肽過氧化物酶的活性。一個試劑盒可進(jìn)行100次檢測。

   本試劑盒如果和谷胱甘肽過氧化物酶檢測試劑盒(YT298)配合使用，可以定量檢測出樣品中不含硒的谷胱甘肽過氧化物酶。

    谷胱甘肽過氧化物酶可以清除活細(xì)胞內(nèi)過氧化物，在保護(hù)細(xì)胞免受自由基損傷過程中起著關(guān)鍵作用。細(xì)胞內(nèi)的脂類容易和自由基發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生脂類過氧化物。谷胱甘肽過氧化物酶可以利用還原型谷胱甘肽(GSH)還原脂類過氧化物，從而消除自由基的毒害作用。谷胱甘肽過氧化物酶幾乎在所有組織中都有分布。在一些病理狀況下谷胱甘肽過氧化物酶的活力會發(fā)生明顯上調(diào)或下調(diào)。

     谷胱甘肽過氧化物酶可以利用還原型谷胱甘肽(GSH)催化過氧化氫以及許多有機(jī)過氧化物，產(chǎn)生水或有機(jī)醇。如果以過氧化氫為底物進(jìn)行檢測，則同樣可以分解過氧化氫的過氧化氫酶的酶活性會干擾谷胱甘肽過氧化物酶的測定。本試劑盒利用了一種間接測定的方法。谷胱甘肽過氧化物酶可以催化GSH產(chǎn)生GSSG，而谷胱甘肽還原酶可以利用NADPH催化GSSG產(chǎn)生GSH，通過檢測NADPH的減少量就可以計算出谷胱甘肽過氧化物酶的活力水平。在上述反應(yīng)中谷胱甘肽過氧化物酶是整個反應(yīng)體系的限速步驟，因此NADPH的減少量和谷胱甘肽過氧化物酶的活力線性相關(guān)。

本試劑盒利用了如下的反應(yīng)原理，GPx為谷胱甘肽過氧化物酶，GR為谷胱甘肽還原酶，R-OOH為過氧化物。


   本試劑盒提供的有機(jī)過氧化物試劑(Cum-OOH)在沒有谷胱甘肽過氧化物酶存在的情況下不會和GSH產(chǎn)生反應(yīng)，也不會被細(xì)胞內(nèi)的過氧化氫酶催化而分解。因而可以較為特異地檢測出谷胱甘肽過氧化物酶的活力。

   有機(jī)過氧化物試劑(Cum-OOH)不僅可以作為含硒的谷胱甘肽過氧化物酶的底物，也可作為不含硒的谷胱甘肽過氧化物酶的底物，因此本試劑盒可以定量檢測總谷胱甘肽過氧化物酶。


試劑盒組份：
樣品勻漿液———————————————100ml
谷胱甘肽過氧化物酶檢測緩沖液——————50ml
谷胱甘肽還原酶—————————————160μl
NADPH——————————————————15mg
還原型谷胱甘肽(GSH)———————————14mg
過氧化物試劑(Cum-OOH)——————————200μl

注意事項(xiàng)：
1. 本試劑盒檢測時牽涉到氧化還原反應(yīng)，所有氧化劑或還原劑都會干擾本試劑盒的測定。如果在樣品中的還原劑無法避免，例如DTT、巰基乙醇等，則這些還原劑的總濃度至少低于0.1mM。0.15mM的DTT可以抑制40%的酶活力。
2. 常用的Triton X-100、Tween 20等去垢劑都含有較高水平的過氧化物，會影響本試劑盒的測定。如果必須使用這些去垢劑，使用純度較高并注明含較低過氧化物的去垢劑。
3. 為消除樣品中可能含有的可以消耗NADPH的酶的干擾，可以檢測不加過氧化物試劑的樣品作為對照。
4. 樣品可以立即測定，也可以-70℃凍存待以后測定。
5. 一定要嚴(yán)格控制反應(yīng)時的溫度，否則會引起較多誤差。
6. NADPH不太穩(wěn)定，要嚴(yán)格按照后續(xù)說明操作，謹(jǐn)防失活。
7. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品

儲存條件：-20℃，有效期一年。