紅色熒光標(biāo)記人源高密度脂蛋白（Human DiI-HDL）操作說明

產(chǎn)品描述

脂蛋白在人體中主要起到運輸脂質(zhì)（如膽固醇、脂質(zhì)、甘油三酯）的作用，按照分子量大小，主要分為以下幾種（從高到低）：乳糜（CM）、極低密度脂蛋白 (VLDL)、中間密度脂蛋白 (IDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、高密度脂蛋白（HDL）等。其中HDL是密度高的脂蛋白，不像其他大分子脂蛋白，主要將脂質(zhì)運輸?shù)郊?xì)胞，HDL是將脂質(zhì)運出細(xì)胞，因此，高密度脂蛋白具有清除血管內(nèi)多余血脂、清除血垢、清潔血管、維持細(xì)胞內(nèi)膽固醇量的相對衡定的作用，從而限制動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，起到抗動脈粥樣硬化作用。

本品Human DiI-High Density Lipoprotein為熒光探針DiI（1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）標(biāo)記的高密度脂蛋白，可以用來觀察培養(yǎng)細(xì)胞的HDL結(jié)合位點，或篩選HDL受體表達(dá)缺陷型細(xì)胞突變株。也可以通過流式細(xì)胞術(shù)評估細(xì)胞受體水平，或檢測組織內(nèi)的受體水平。

提供的Human DiI-HDL為無菌包裝，可以直接稀釋使用。除提供DiI-HDL，我們還提供不帶標(biāo)記的HDL，I¹²⁵標(biāo)記的HDL。

制備方法

純化的人健康血漿來源的HDL直接標(biāo)記上DiI熒光探針，然后通過超速離心以及透析的方法純化回收標(biāo)記產(chǎn)物，并濾膜過濾除菌。純化的DiI-HDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS，pH 7.4中。

運輸與保存方法

冰袋運輸；

4ºC無菌避光，收到貨后可穩(wěn)定保存6周。千萬不可凍存！使用時一定要無菌操作！

注意事項

1) 本品的稀釋工作液極不穩(wěn)定，建議即配即用；

2) 長期貯存可能會有沉淀析出，屬于正?，F(xiàn)象，低速離心2 min去除沉淀即可使用；

3) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

紅色熒光標(biāo)記人源高密度脂蛋白（Human DiI-HDL）操作步驟

1) 無菌條件下，將DiI-HDL用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至10-30 µg/ml。

2) 加入活細(xì)胞內(nèi)，37℃培養(yǎng)4-5小時。

3) 孵育結(jié)束，吸去含有Human DiI-HDL的培養(yǎng)基，并用無探針的培養(yǎng)基洗幾次。

4) 根據(jù)實驗需求用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測。

a) 熒光顯微鏡觀察

采用標(biāo)準(zhǔn)的羅丹明激發(fā)：發(fā)射濾光片（或建議使用波長為：Ex/Em=549nm/565nm）；若需要請使用含3%甲醛的PBS進(jìn)行固定，切勿使用甲醇或丙酮固定，因DiI易溶于有機溶劑?！?/span>注】：需設(shè)陽性細(xì)胞以做對照。

b）  細(xì)胞分選（流式細(xì)胞術(shù)）

胰蛋白酶處理細(xì)胞或者加入EDTA制成單細(xì)胞懸液，選用合適的已標(biāo)記純化細(xì)胞用作陰性和陽性對照，從而進(jìn)行流式分選設(shè)門（gate）。（建議使用波長為Ex: 514/549nm; Em: 565nm）。