大腸桿菌檢測(cè)板

1 原理及適用范圍：

大腸桿菌（E. coli）為埃希氏菌屬（Escherichia）代表菌。一般多不致病，為人和動(dòng)物腸道中的常居菌，在一定條件下可引起腸道外感染。某些血清型菌株的致病性強(qiáng)，引起腹瀉，統(tǒng)稱致病性大腸桿菌。大腸桿菌檢測(cè)板含有選擇性培養(yǎng)基、大腸桿菌特異性酶的顯色指示劑和高分子吸水凝膠，運(yùn)用微生物檢測(cè)板專有技術(shù)，做成一次性快速檢驗(yàn)產(chǎn)品。本產(chǎn)品適合于食品及原料中大腸桿菌的計(jì)數(shù)，如消毒牛乳、冷飲和調(diào)味品等樣品的檢測(cè)，也可用于表面的衛(wèi)生檢測(cè)。

執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)  大腸桿菌計(jì)數(shù)》（GB 4789.38）。

2 大腸桿菌檢測(cè)板操作方法

2.1 樣品處理：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌磷酸緩沖液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)袋內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，根據(jù)樣品污染程度及檢驗(yàn)需要，可進(jìn)一步制成10倍遞增的樣品稀釋液。

2.2 接種：一般食品選2～3個(gè)適宜的稀釋度進(jìn)行檢測(cè)，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進(jìn)行檢測(cè)。將大腸桿菌檢測(cè)板置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開上層膜，用無(wú)菌吸管吸取1 mL樣品勻液滴加到檢測(cè)板內(nèi)，迅速貼好上層膜并水平晃動(dòng)檢測(cè)板，讓樣品勻液均勻吸附在濾紙上，靜置10 s左右，待樣品勻液*被吸附在濾紙上。每個(gè)稀釋度接種兩片。做好空白陰性對(duì)照。

2.3 培養(yǎng)： 將檢測(cè)板疊在一起，倒置放于培養(yǎng)箱內(nèi)。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。

3 大腸桿菌檢測(cè)板結(jié)果判讀

培養(yǎng)后紙片上的藍(lán)色菌落為大腸桿菌，選擇菌落數(shù)適中（15～150CFU）的紙片進(jìn)行計(jì)數(shù)。兩個(gè)檢測(cè)板的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)即為每克（或每毫升）樣品中的大腸桿菌菌落行程單位數(shù)。如果所有的稀釋度檢測(cè)板上的菌落數(shù)都小于15CFU，則計(jì)數(shù)稀釋度zui低的檢測(cè)板上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；如果所有的稀釋度的檢測(cè)板上均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以zui低稀釋倍數(shù)報(bào)告；如果zui高稀釋倍數(shù)大于150CFU的檢測(cè)板時(shí)，可計(jì)數(shù)一半或者1/4，然后再乘以2或者4，即為檢測(cè)板上估算的菌落數(shù)。報(bào)告單位以CFU/g（或CFU/mL）表示。

4 附加說(shuō)明

4.1大腸桿菌檢測(cè)板不但可以大大縮短檢測(cè)時(shí)間，而且檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)方法很接近，符合率可達(dá)90％左右。

4.2如果樣品的酸堿度pH 7.0以下時(shí)，應(yīng)先用滅過(guò)菌的堿性溶液（如1 mol/L NaOH）調(diào)節(jié)到pH6.5～7.5。

4.3注意使用過(guò)的檢測(cè)板上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。